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低剂量X射线照射对K562细胞周期及凋亡影响的实验研究
目的 低剂量照射(low-dose radiation,LDR)可调节细胞信号传导,通过各种基因和蛋白的表达改变其分子生物学效应,由此产生了多样复杂且不同于大剂量照射的生物效应.用LDR及LDR联合大剂量照射(high-dose radiation,HDR)人红白血病细胞系K562(CML),探讨LDR对K562细胞周期进程及凋亡的影响.方法 按照K562细胞照射剂量不同分为4组,对照组(0 Gy)、LDR组(0.08、0.50 Gy)、HDR组(6 Gy)及LDR联合HDR组(0.08/6 Gy、0.50/6 Gy,LDR/HDR组).采用6 MVX射线照射,LDR与HDR间隔8 h;照射后按不同时间点收集细胞,流式细胞仪检测细胞周期变化与凋亡并分析细胞DNA倍体变化.结果 LDR后6h各组S期比例增加,对照组与LDR各组分别为55.38±2.22 vs 71.91±7.30、73.13±4.09(Z=-2.428,P=0.022;Z=-3.987,P＜0.001);12 h G2/M期细胞比例增加,出现G2/M阻滞,24 h达峰值,对照组与LDR各组分别为17.81±1.27 vs 26.61±7.82、29.02±2.76(Z=-3.684,P＜0.001;Z=-2.928,P＜0.001);48 h各组G0/G1细胞增多,72 h达峰值,对照组与LDR各组分别为27.07±1.19 vs 52.32±2.42、44.06±1.90(Z=-2.351,P=0.020;Z=-2.172,P=0.032).LDR/HDR后6hS期细胞比例增多,且G2/M期比例增加,即G2/M期阻滞,12 h达峰值并持续至24 h,12 h HDR组与LDR/HDR各组G2/M期分别为26.98±2.15 vs 56.27±1.57、69.31±2.51(Z=-2.564,P=0.021;Z=-7.759,P＜0.001).LDR后48 h凋亡率增加,96 h达峰值,对照组与LDR各组分别为1.82±0.12 vs3.21±0.20、6.28±0.30(Z=-3.959,P=0.003;Z=-9.705,P＜0.001);LDR/HDR照射后24 h凋亡率增加,120 h达峰值,HDR组与LDR/HDR各组分别为14.21±0.61 vs 17.38±0.92、27.91±1.07(Z=-2.986,P=0.027;Z=-6.973,P＜0.001).LDR后6h各组四倍体及八倍体细胞增加,且随照射剂量增大而增多,对照组与LDR各组八倍体细胞分别为2.41±0.15 vs 4.84±0.46、7.83±0.59,差异有统计学意义,H值分别为5.956和7.200,P值分别为0.025和0.001;LDR/HDR后6h各组四倍体及八倍体细胞增加,亦随LDR剂量增大而增多,HDR组与LDR/HDR各组八倍体细胞分别为6.49±1.05 vs 10.80±1.23、13.77±0.79,差异有统计学意义,H值分别为5.600和7.200,P值分别为0.05和0.001.结论 LDR能诱导K562凋亡,并能增强随后HDR对K562凋亡作用;LDR能诱导S/M期解偶联及G2/M期阻滞等细胞周期进程改变;LDR诱导K562凋亡可能与S/M期解偶联及G2/M期阻滞等改变细胞周期进程有关.
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RNA干扰p21基因对X射线诱导细胞周期解耦联的影响
目的 研究RNA干扰p21基因对X射线诱导细胞周期解耦联的影响.方法 构建RNA干扰质粒pSilencer3.1-H1 neo-p21,并采用脂质体转染将质粒转入EL-4细胞.采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术(FCM)检测蛋白表达的变化.采用碘化丙啶(PI)荧光标记及FCM检测多倍体细胞数的变化.结果 量效实验证实,1.0～4.0Gy X射线照射后24 h,EL-4细胞中P21蛋白表达与对照组相比较显著增高.时效实验证实,4.0 Gy X射线照射后8～72 h,EL-4细胞中P21蛋白表达与对照组相比较显著增高.实验证实,0.5～6.0 Gy X射线照射后,EL-4细胞的八倍体细胞数未见明显变化,X射线照射不诱导EL-4细胞周期解耦联.RNA千扰实验证实,p21基冈沉默后,P21蛋白表达于4.0 Gy照射后24及48 h,干扰质粒纽与空质粒对照组相比较显著降低;与此同时,干扰质粒组的八倍体细胞数与空质粒组相比较显著增高.结论 RNA干扰p21基因使P21蛋白表达抑制后,X射线照射可诱导EL-4细胞周期解耦联.提示,P21蛋白可能在电离辐射诱导细胞周期解耦联中起重要作用.
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电离辐射诱导EL-4细胞Caspase-3、P53蛋白表达及其生物学作用
目的 研究电离辐射对EL-4细胞中Caspase-3和P53蛋白表达的影响,及其对辐射诱导细胞凋亡及多倍体细胞的作用.方法 采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测蛋白表达的变化,采用PI荧光标记及流式细胞术检测细胞凋亡及多倍体细胞的变化.结果 实验表明,4.0 Gy X射线照射后8及12 h,EL-4细胞中Caspase-3蛋白表达与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);照射后2、4、8、12及24 h,P53蛋白表达与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).实验还表明,4.0 Gy照射后2、4、8、12、24、48及72 h,EL-4细胞凋亡与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05～P＜0.001);而照射后2～48 h,多倍体细胞数与对照组比较则未见明显变化.结论 电离辐射可诱导EL-4细胞Caspase-3及P53蛋白表达增高,可能在辐射诱导细胞凋亡中起重要作用,而辐射诱导多倍体细胞的分子通路则可能是P53非依赖性的.
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吸烟对精液DNA指标影响的研究
目的 探讨吸烟对精液DNA指标的影响,以促进男性生殖健康.方法 选择322例合格的研究对象,其中195例为吸烟者,127例为不吸烟者,通过问卷调查方法收集对象的背景信息、吸烟暴露情况以及可能的混杂因素,同时收集所有研究对象的精液标本,分析吸烟对精液DNA指标的影响.结果 吸烟使精液中单倍体精子的比例降低,同时使二倍体细胞以及多倍体细胞的比例升高.结论 吸烟对精液质量可能有不良影响,且精液DNA指标可能对烟的作用更为敏感.对大量或长期吸烟者,其影响更为深远,应当广泛提倡戒烟.
