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RNA干扰p21基因对X射线诱导细胞周期解耦联的影响
目的 研究RNA干扰p21基因对X射线诱导细胞周期解耦联的影响.方法 构建RNA干扰质粒pSilencer3.1-H1 neo-p21,并采用脂质体转染将质粒转入EL-4细胞.采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术(FCM)检测蛋白表达的变化.采用碘化丙啶(PI)荧光标记及FCM检测多倍体细胞数的变化.结果 量效实验证实,1.0～4.0Gy X射线照射后24 h,EL-4细胞中P21蛋白表达与对照组相比较显著增高.时效实验证实,4.0 Gy X射线照射后8～72 h,EL-4细胞中P21蛋白表达与对照组相比较显著增高.实验证实,0.5～6.0 Gy X射线照射后,EL-4细胞的八倍体细胞数未见明显变化,X射线照射不诱导EL-4细胞周期解耦联.RNA千扰实验证实,p21基冈沉默后,P21蛋白表达于4.0 Gy照射后24及48 h,干扰质粒纽与空质粒对照组相比较显著降低;与此同时,干扰质粒组的八倍体细胞数与空质粒组相比较显著增高.结论 RNA干扰p21基因使P21蛋白表达抑制后,X射线照射可诱导EL-4细胞周期解耦联.提示,P21蛋白可能在电离辐射诱导细胞周期解耦联中起重要作用.
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P53在电离辐射诱导的细胞周期解耦联中的作用
目的 探讨p53基因在电离辐射(IR)诱导的MCF-7细胞周期解耦联中的作用.方法 构建RNAi表达载体,经磷酸钙共沉淀法转染293T细胞形成病毒包装颗粒,感染MCF-7后采用Western blot检测P53蛋白的表达,建立p53基因沉默模型.将p53野生型(+/+)和沉默模型(-/-)经电离辐射处理后,采用流式细胞术分别测定细胞周期并分析细胞多倍体的变化.结果 与p53+/+组比较,p53-/-模型组G0/G1期细胞百分数减少,S期、G2期增加(P<0.01),倍体分析表明二倍体数减少,四倍体、八倍体均增加(P<0.01).在p53+/+和p53-/-细胞中,与假照射组比较,4 Gy照射后G0/G1期、S期细胞百分数减少,而G2期增多(P<0.01);倍体分析表明,照射后二倍体数减少,四倍体、八倍体均增加(P<0.01).与p53+/++IR组比较,p53-/-+IR组发生G0/G1期、S期细胞百分数减少,G2+M期增多(P<0.01),二倍体数减少,四倍体增多(P<0.01),八倍体无明显差别.结论 电离辐射可以诱导细胞发生G2期阻滞和细胞周期解耦联;P53在电离辐射诱导的MCF-7细胞G2期阻滞中发挥作用,而在细胞周期解耦联中可能不发挥作用.
