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自身淬灭探针荧光定量PCR检测BK多瘤病毒方法的建立与评价
目的 利用自身淬灭探针技术建立一种敏感、特异、快速、价廉的BK多瘤病毒(BKV)荧光定量PCR检测方法.方法 构建重组质粒pGEM-11Zf-BK作为标准品,自行设计自身淬灭探针,优化定量PCR体系,并进行方法学评价及初步临床应用.结果 成功构建了重组质粒pGEM-11Zf-BK,建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法,其线性检测范围为103～109拷贝/ml2;灵敏度为1000拷贝/ml;重复性:高拷贝样品的天间CV为3.06%,批内CV为1.49%,批问CV为3.27%;低拷贝样品的天间CV为2.55%,批内CV为0.65%,批间CV为3.36%,特异性为100.00 oA;用该方法检测52例肾移植受者的血、尿标本,结果发现肾移植受者血、尿BKV DNA的阳性率明显高于健康对照者,分别为15.38%、32.69%,尿BKV DNA的载量明显高于血BKV DNA的载量(P＜0.05).结论 首次建立了以自身淬灭探针技术为平台的BKV荧光定量PCR检测方法,该方法灵敏、特异,快速;该研究对应用自身淬灭探针技术开发其他病原体检测试剂有一定的参考价值.
关键词： BK多瘤病毒 自身淬灭探针 荧光定量聚合酶链反应 -
尿BK病毒载量与干细胞移植后出血性膀胱炎的关系
目的 分析BK病毒尿与造血干细胞移植(HSCT)术后迟发性出血性膀胱炎(LOHC)的相关性,探讨BK病毒载量与LOHC发病的关系.方法 收集2006年8月至2008年4月113例HSCT患者的晨尿标本,提取病毒DNA,崩PCR方法扩增多瘤病毒DNA,以4JD名健康成人为对照.用实时定量PCR方法检测尿BK病毒阳性患者在LOHC不同时期的尿标本中BK病毒DNA拷贝数.结果 113例HSCT患者中22例(19.5%)发生HC,中位发生时间为+44(+13～+114)d,包括1级7例,2级11例,3级3例,4级1例.其中21例(95.5%)LOHC患者尿标本经PCR检出BK病毒,检出率明显高于非LOHC组(31.9%)(P=0.000).健康对照组均未检出BK病毒.定量PCR检测结果显示,LOHC患者尿BK病毒DNA拷贝数在HC发病前1周的平均水平较初次阳性时有明显上升(105拷贝数/μl比104拷贝数/μl),在HC发病当周及缓解后1周无明显改变.不同级别LOHC患者在发病前和发病时尿BK病毒DNA拷贝数差异无统计学意义.非LOHC患者尿中BK病毒DNA拷贝数平均水平为103～104拷贝数/μl,低于LOHC患者.结论 BK病毒尿是HSCT后LOHC的重要致病原因.如HSCT患者尿中BK病毒DNA拷贝数呈动态上升并超过105拷贝数/μl时可能预示LOHC的发生.
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广西苗族健康人外周血淋巴细胞中BKV-DNA的研究
目的 了解广西苗族健康人多瘤病毒(BKV)的感染情况,为防治BKV相关性肾病(BKVN)提供理论依据.方法 采集广西苗族和汉族健康人外周血标本各500例,提取外周血淋巴细胞(PBLs)基因组DNA,用巢式PCR方法 扩增保守区编码序列,统计分析不同民族BKV-DNA检出率.结果 苗族健康人群PBLs样品中BKV-DNA序列检出率为62.00%,汉族人群检出率为59.00%,两民族BKV- DNA检出率差异无统计学意义(P>0.05).结论 BKV在广西苗族及汉族健康人群PBLs中均存在较高感染率.正常人PBLs是BKV在人体内的潜伏靶点及传播工具,应加强对BKV条件致病性的认识,积极防治以减少BKVN的发生率.
