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Wnt-1基因对人表皮干细胞的分化与增殖的影响研究
目的 探讨Wnt-1基因对人表皮干细胞分化与增殖的影响.方法 将Wnt-1基因用重组腺病毒基因导入技术导入人表皮干细胞内,在证实Wnt-1基因在人表皮干细胞中导入成功后,检测人表皮干细胞的增殖能力、标记性分子、基质金属蛋白MMP-2、MMP-7浓度及细胞内Ca2+浓度等指标的变化.结果 分离获取的人表皮干细胞在接种后第3天进入快速生长期,第7天时到达平台期;Wnt-1基因导入人表皮干细胞后,可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR检测到了Wnt-1mRNA的存在,台盼兰excell系统检测发现人表皮干细胞直径无明显变化,而细胞增殖则明显加强;培养基中的MMP-2的浓度由感染前(-21.33±3.34)增加到感染后的(812.33±41.26)、MMP-7的浓度均值由感染前(17.33±2.31)增加到感染后的(1126.44±13.56),差异均有统计学意义(P<0.01);人表皮干细胞内Ca2+浓度明显升高,作为上皮终末分化标志的K10表达变为阳性;在汗腺分泌部表达的K18表达增强;作为干细胞和腺上皮细胞共同标记的K19的阳性明显减弱.结论 导入Wnt-1基因后,人表皮干细胞增殖能力明显增强,细胞直径则没有明显变化;人表皮干细胞培养基中NPVIP-2和MMP-7的浓度均显著增高;Wnt-1的导入能够诱使人表皮干细胞内Ca2+浓度升高;Wnt-1基因具有诱使人表皮干细胞向腺样上皮细胞分化的倾向.
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Wnt-1基因在神经干细胞向神经元分化过程中的表达
目的研究Wnt-1基因在全反式维甲酸(ATRA)诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元过程中的表达及其作用.方法用1μmol/L的维甲酸诱导人胚胎神经干细胞,诱导7d后,做NSE免疫荧光染色,计数分化为神经元的比例.于ATRA诱导前、诱导3d和诱导7d,提取细胞的总RNA.用半定量RT-PCR法检测Wnt-1基因的表达情况.结果与对照组相比,全反式维甲酸能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例(P＜0.01).Wnt-1基因在维甲酸诱导后明显上调(P＜0.001).结论Wnt-1基因在全反式维甲酸诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中起正调控作用,Wnt-1基因与神经元的分化关系密切.
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卵巢癌组织中MDR-1、Wnt-1、FZD-1基因的表达变化及其与化疗耐药的关系
目的 观察化疗及非化疗卵巢癌组织中多药耐药基因-1( MDR-1)及Wnt-1、FZD-1基因的表达变化,探讨其与卵巢癌化疗耐药的关系.方法 卵巢癌患者60例,包括紫杉醇化疗组(Ⅰ组)和未化疗组(Ⅱ组)各30例,Ⅰ组分为先期化疗有效组(ⅠA组)22例和化疗后复发组(ⅠB组)8例.采用实时荧光定量RT-PCR技术检测各组卵巢癌组织中的MDR-1、Wnt-1、FZD-1基因.结果 Ⅰ组MDR-1基因阳性表达率为70%(21/30),Ⅱ组为86%(26/30),两组相比,P＞0.05;ⅠB组MDR-1阳性6例(6/8),较ⅠA组的15例(15/22)略高,但两组相比,P＞0.05.Wnt-1基因在MDR-1表达阳性的卵巢癌组织中的Ct值为4.742 9±0.756 9,与MDR-1阴性者的3.298 1±1.489 7相比,P＜0.01.FZD-1基因在MDR-1表达阳性的卵巢癌组织中的Ct值为3.677 3±1.220 8,与MDR-1阴性者的4.898 0±0.633 9相比,P＜0.01.在Ⅰ组中,MDR-1和Wnt-1、FZD-1基因的表达呈正相关(r分别为0.525、0.678,P均＜0.05);但在Ⅱ组中,MDR-1和Wnt-1、FZD-1基因的表达无相关性(r分别为-0.091、 0.031,P均＞0.05).结论 卵巢癌组织中MDR-1基因有较高的阳性表达率,与卵巢癌的化疗耐药有关,MDR-1基因可能通过抑制Wnt-1、FZD-1基因的表达而发挥作用.
