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可溶型LAIR分子与肾移植术后巨细胞病毒肺炎的关系
目的 探讨可溶型LAIR分子(sCD305,CD306)与肾移植术后巨细胞病毒(CMV)肺炎的关系. 方法肾移植受者血清19份,分为肺炎组(10份)和对照组(9份);以夹心ELISA方法定量检测血清中sCD305和CD306的浓度;用CHISS软件进行:检验. 结果 2组sCD305浓度均不符合正态分布,肺炎组波动于0.000～3.039 μg/L,对照组波动于0.000～8.375μg/L;肺炎组CD306浓度不符合正态分布,波动于0.000～0.017 μg/L,对照组符合正态分布.浓度为(0.046±0.035)μg/L;CD306在CMV肺炎患者血清内的表达降低,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.000),而sCD305在2组的表达差异无统计学意义(P=0.316). 结论 CD306在肾移植术后发生CMV肺炎的患者血清内表达明显降低,CMV-PP65抗原检测联合CD306检测,有助于临床准确早期诊断CMV肺炎.
关键词： 白细胞相关免疫球蛋白样受体 CD305 CD306 肾移植 巨细胞病毒 -
人白细胞相关免疫球蛋白样受体1/白细胞相关免疫球蛋白样受体2可能配体的生物信息学分析及鉴定
背景:通过筛选小鼠反转录病毒cDNA文库和质谱分析的方法鉴定出一种跨膜的胶原XVII是白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体之一,然而,二者的其他配体尚未得到鉴定.目的:采用生物信息学法鉴定白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD305/306)的候选配体分子.设计、时间及地点:生物信息学预测及生物学方法验证,于2006-03/2007-09在第四军医大学免疫教研室完成.材料:人WISH和Hela细胞系南第四军医大学免疫教研室冻存.方法:应用生物信息学方法搜索白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2序列同源分子,并通过文献检索初步推测白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体候选分子.后应用候选分子基因转染K562细胞,并应用白细胞相关免疫球蛋白样受体1-Fc/白细胞相关免疫球蛋白样受体2-Fc融合蛋白进行活细胞荧光染色,流式细胞术分析鉴定候选分子是否与融合蛋白结合.同时,合成两对候选分子的引物,提取高表达白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2配体分子的细胞系WISH的cDNA,进行巢式PCR,检测WISH中候选分子的表达情况.主要观察指标: 应用人类基因组数据库对白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2分子氨基酸序列同源性比对结果,流式细胞术分析白细胞相关免疫球蛋白样受体分子是否与可能配体基因转染细胞结合,巢式PCR分析白细胞相关免疫球蛋白样受体配体高表达细胞是否表达可能配体基因.结果:应用生物信息学方法和文献检索初步推测白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体候选分子为人类白细胞抗原G分子.经流式细胞术鉴定,白细胞相关免疫球蛋白样受体1-Fc/白细胞相关免疫球蛋白样受体2-Fc融合蛋白对人类白细胞抗原G基因转染的K562细胞的荧光染色结果为阴性;经巢式PCR鉴定,高表达白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2配体分子的WISH细胞系中未发现人类白细胞抗原G基因.结论:人类白细胞抗原G不是白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体.
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白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD306)真核表达载体构建及蛋白的纯化与鉴定
背景:目前国内外对白细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyte-associated immunoglobulin like-receptor,LAIR)家族中LAIR1 的生物学功能研究已较清晰,而关于LAIR-2分子在机体内的生物学功能尚缺乏相关报道.目的:为进一步研究LAlR-2的体内生物学功能,构建其真核表达载体,纯化并鉴定蛋白.设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2007-06/2008-06在解放军第四军医大学完成.材料:载体pig/3c由英国牛津大学徐小宁博士惠赠.载体pcDNA3.1由荷兰Meyaard博士惠赠.中国仓鼠卵巢细胞系CHO由解放军第四军医大学免疫学教研室冻存.方法:构建plg/3c-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2两个真核表达载体,电转染法转染CHO细胞建立稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长蛋白分子的细胞株,通过Western blot、细胞免疫化学、流式细胞术分析实验鉴定真核表达LAIR-2蛋白分子与抗原核表达LAIR-2 mAbs的结合活性.主要观察指标:稳定转染细胞系的建立及真核表达蛋白的纯化和鉴定.LAIR-2蛋白与相应单克隆抗体的结合活性.结果:构建真核表达载体并成功转染CHO细胞,建立稳定分泌LAIR-2-Fc融合蛋白的转染细胞系及稳定分泌LAIR-2蛋白的转染细胞系,分别命名为CHO/LAIR-2-Fc以及CHO/LAIR-2.Western blot实验表明真核表达的LAIR-2全长蛋白分子均可与三株抗LAIR-2 mAb 1A7、3H12及4A9发生特异性结合反应.免疫细胞化学、流式细胞术分析实验结果表明抗原核细胞表达蛋白的三株LAIR-2单克隆抗体中,1A7不能结合pcDNA3.1-LAIR-2转染的CHO细胞内的LAIR-2,面3H12和4A9均可以很好结合细胞内的LAIR-2.结论:实验成功构建了plg/3c-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2两个真核表达载体,成功转染CHO细胞并建立稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长蛋白分子的细胞株.真核表达的LAIR-2蛋白分子与抗原核表达的LAIR-2 mAbs有良好的结合活性.
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LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)与配体结合亲和力的比较
目的:LAIR-1/LAIR-2(CD305/306)与配体结合亲和力的比较.方法:应用不同浓度混合的LAIR-1和LAIR-2融合蛋白,同时或先后与配体表达细胞孵育后,用特异性LAIR-1或LAIR-2单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,比较LAIR-1和LAIR-2融合蛋白与细胞结合的百分率的变化及相互竞争情况.结果:LAIR-1和LAIR-2膜型配体的分布较广泛,人和小鼠LAIR受体与配体的结合具有相互交叉的特点.LAIR-2能够明显阻断LAIR-1与其膜型配体的结合,而LAIR-1对LAIR-2与其配体的结合无影响.结论:LAIR-1和LAIR-2可能结合相同的膜型配体,但LAIR-2结合配体的亲和力明显高于LAIR-1结合的亲和力.此结果为深入探讨LAIR家族免疫调节的分子机制提供重要的实验依据.
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LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)推定配体分布的研究
目的: 研究LAIR-1(CD305)及LAIR-2(CD306)推定配体在多种细胞系上的分布,为鉴定LAIR-1/LAIR-2推定配体提供了实验依据.方法:建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系.以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色,用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达,并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点.结果:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达,在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达.LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合,可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体(mAb)FMU-LAIR-2.2和FMU-LAIR-2.1阻断.结论:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致,主要表达于WISH、 C32、293T和ECV304细胞系.LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体.
