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趋化因子VCC-1在肝细胞癌中的表达及其意义
目的 研究趋化因子VCC-1在肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR法检测8种肝细胞癌细胞株、10例正常肝脏组织标本、42例肝癌组织及癌旁组织中的VCC-1的mRNA表达情况,并结合临床资料探讨VCC-1的临床意义.结果 肝细胞癌细胞株中,SUN398的VCC-1表达量高,Hep3B和Huh7几乎不表达,SUN387、SUN449、SUN423、HepG2、PLC5的表达介于两者之间.42例肝癌患者标本中,癌组织及癌旁组织同时存在表达,癌组织高于癌旁组织26例(61％,14.9±7.6倍),癌旁组织高于癌组织16例(39％,6.9±5.4倍).癌组织表达上调(P＜0.01).VCC-1的表达水平与肿瘤分化程度、直径有关(P＜0.05).在10例正常肝脏标本中,8例无表达,2例微表达,其表达水平低于癌细胞株、肝癌组织及癌旁组织(P＜0.01),而复发的3例标本均有癌组织高表达(20.1±2.3倍).有癌栓的8例标本中,5例出现癌组织VCC-1高表达(17.3±4.5倍),3例低表达.结论 VCC-1表达升高可能与肝细胞癌的发生发展有关,并有可能成为肝细胞癌的治疗靶点.
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siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响
目的 探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响.方法 采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1(VCC-1)基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTF法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响.结果 Western blot结果显示RNA干扰组(shVCC1-1组)细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.01),MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组(P＜0.05).结论 siRNA靶向抑制VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力.
关键词： VCC-1 肝癌 SMMC7721细胞 siRNA -
VCC-1慢病毒表达载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响
目的:构建小趋化因子VCC-1的慢病毒表达载体并研究其对人胶质瘤细胞株U251增殖的影响.方法:以人结肠癌细胞为模板扩增VCC-1基因,并连入pMX载体,挑取测序正确的克隆在293 T细胞中表达,并用realtime-PCR和Westernblot进行验证.结果:成功构建了人VCC-1的慢病毒表达载体,并感染了星形胶质瘤细胞系U251.结论:证明了VCC-1基因在胶质瘤细胞的增殖过程中起促进作用,并为后续研究VCC-1和胶质瘤形成发展和浸润的机制提供了良好的基础.
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新趋化因子VCC-1小干扰RNA真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建对VCC-1基因有特异性抑制作用的小干扰RNA(siRNA)表达载体.方法 根据VCC-1 mRNA序列,按照siRNA设计原则设计4条特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中.酶切鉴定和测序验证阳性克隆.用脂质体转染SMMC7721细胞,以RT-PCR分析其对VCC-1 mRNA表达的影响.结果 经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功.pGPU6/GFP/Neo-siRNA、B、C、D载体均能抑制SMMC7721细胞VCC-1基因mRNA的表达,其中重组质粒C抑制作用强.结论 成功构建了靶向人VCC-1的小干扰RNA表达载体,为进一步研究VCC-1的功能奠定了基础.
关键词： VCC-1 小干扰RNA表达载体 SMMC7721细胞 RNA干扰 -
VCC-1真核表达载体的构建及肝癌细胞SMMC7721稳定转染株的建立及鉴定
目的:构建pcDNA3.1(一)/VCC-1真核表达载体并将其稳定转染到肝癌细胞系SMMC-7721中.方法:以SMMC7721细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增VCC-1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段与pMD19-T载体连接后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(一)中.重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导人到人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用RTPCR及Western blot检测转染前后该细胞株VCC-1基因的表达.结果:pcDNA3.1(一)/VCC-1经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功;经RT-PCR及Westcm blot检测,重组质粒转染株的VCC-1基因的表达水平高于对照组,证实VCC-1基因稳定转染到SMMC-7721细胞中并得到表达.结论:成功地建立了人基因VCC-1的肝癌细胞SMMC-7721稳定转染株,为进一步研究VCC-1的功能奠定了基础.
