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3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血caspase-3活性和神经细胞凋亡的影响
目的探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血脑梗死体积、脑缺血半暗带半胱天冬酶-3(caspase-3)活性和神经细胞凋亡的影响. 方法大鼠腹腔注射3-NPA 3 d后制作大脑中动脉闭塞模型,采用TTC染色、TUNEL法、流式细胞术和荧光测定法,观察3-NPA预处理对缺血2 h再灌注24 h脑梗死体积、神经细胞凋亡和caspase-3活性的影响. 结果缺血2 h再灌注24 h, 3-NPA预处理组脑梗死体积减小22.3%,caspase-3活性降低13.9%,TUNEL阳性细胞数和细胞凋亡百分率分别减少47.0%和43.9%,与对照组比较差异有显著性. 结论 3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受,降低caspase-3活性,抑制神经细胞凋亡可能是其机制之一.
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三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡中Caspase-3活力的研究
目的 观察三氯乙烯(TCE)诱导离体培养的人角质形成细胞(KC)Caspase-3活力变化及细胞凋亡情况,探讨TCE诱导KC凋亡的可能信号通路.方法 以不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mmol/L)TCE对离体分离培养的KC分别染毒至4、8、12、24 h;Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)预处理组,先用100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理细胞1 h,然后再用2.000 mmol/L TCE染毒12 h.用分光光度法检测细胞Caspase-3活力变化,借助Annexin-V/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照相比,TCE染毒4 h,各TCE剂量组Caspase-3活力无明显变化(P>0.05);染毒8 h,1.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力和2.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);TCE染毒12 h和24 h,各TCE剂量组Caspase-3活力明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且呈剂量-效应关系.各TCE剂量组,在TCE浓度达到0.250 mmol/L以后,细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且明显呈剂量-效应关系.Z-DEVD-FMK预处理组,与2.000 mmol/L TCE组比较,Caspase-3活力和细胞凋亡率明显得到抑制(P<0.01),而与空白对照相比差异无显著性(P>0.01).结论 在TCE诱导离体培养的KC凋亡中,Caspase-3的活化可能发挥了重要的作用.
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人参花蕾提取物对90 d喂养大鼠生化指标及细胞凋亡的影响
目的 观察服用人参花蕾提取物对SD大鼠生化指标及细胞凋亡的影响.方法 50只SD雄性大鼠随机分为5组,剂量0～6.0 g/kg,每组10只.将样品掺入饲料中喂养90 d后,取颈动脉血栓测生化指标,取肝脏检测肝细胞凋亡及丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力.结果 ①各组丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总蛋白、白蛋白、血糖、肌酐、尿素氮、三酰甘油、总胆固醇水平与对照组比较均无统计学意义(P＞0.05);②0.5 g/kg组肝细胞凋亡率明显低于对照组(P＜0.05),3.0、6.0 g/kg组肝细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.05);③各组MDA含量明显降低(P＜0.05),SOD活力无明显变化(P＞0.05),1.0、3.0、6.0 g/kg组GSH-Px活力明显升高(P＜0.05).结论 人参花蕾提取物可通过降低MDA含量、升高GSH-Px活力增加大鼠肝脏抗氧化能力,并对肝细胞凋亡产生影响,而对血生化指标无明显影响.
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镉诱导293细胞凋亡与Caspase-3和p53表达关系
目的 研究镉致细胞凋亡过程中Caspase-3和p53表达的变化,探讨Caspase-3和p53基因在镉致细胞凋亡中的作用.方法 离体培养的转化人胚肾293细胞以40 μmol/L氯化镉分别处理0～24 h,N-乙酰半胱氨酸(NAC)和Caspase-3特异性三肽抑制剂(Z-DEVD-fmk)预处理组分别在镉处理前以5 mmol/L NAC和10 μmol/L Z-DEVD-fmk预处理24 h和1 h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot法测Caspase-3和p53水平,流式细胞Anexin-V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 40 μmol/L镉处理293细胞,6～24 h Caspase-3基因mRNA水平显著增高,0～24 h内p53基因mRNA无显著变化.40 μmol/L镉处理293细胞,6～24 h内Caspase-3相对分子质量20 000的活性亚单位条带显著增强,与镉处理24 h组比较,NAC预处理组Caspase-3相对分子质量20 000的活性亚单位条带显著减弱(P＜0.01),Z-DEvD-fmk预处理组无明显变化(P＞0.05);40 μmol/L镉处理293细胞,p53蛋白在6～24 h表达增强(P＜0.01),与单纯镉处理24 h组比较,NAC和Z-DEVD-fmk预处理组p53蛋白表达无显著变化(P＞0.05).结论 Caspase-3基因在镉诱导细胞凋亡过程中起着重要的作用.
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翼状胬肉中端粒酶催化基团与凋亡相关基因蛋白的表达
目的探讨端粒酶逆转录酶催化亚基(telomerase reverse transcriptase,hTRT)和抑凋亡基因bcl-2、凋亡基因bax产物在翼状胬肉发病机制中的作用.方法应用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学方法,检测20例翼状胬肉、9例正常结膜组织中hTRT、bcl-2、bax基因产物的表达.结果 hTRT 和bcl-2在翼状胬肉中的阳性表达率显著高于正常结膜(P<0.01),主要表达于翼状胬肉的上皮基底层细胞,正常结膜无表达; bax在翼状胬肉与正常结膜中的表达无显著差异.hTRT与bcl-2表达呈正相关.结论翼状胬肉的发生、发展与hTRT和bcl-2、bax的异常表达有关,可能是细胞异常增殖和凋亡失衡的共同结果.
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三氯乙烯引起BALB/c裸鼠刺激性接触性皮炎作用机制的研究
目的 研究细胞凋亡在三氯乙烯(TCE)引起BALB/c裸鼠皮肤刺激性损伤中的作用.方法 将30只BALB/c裸鼠按随机的原则分成100%TCE、80%TCE、40%TCE、20%TCE、10%TCE、溶剂对照组(橄榄油),TCE背部皮肤染毒1d,应用原位末端标记法检测裸鼠皮肤组织的细胞凋亡,应用免疫组化S-P法检测皮肤上皮组织Caspase-3的表述.结果 免疫组化结果显示各染毒剂量组皮肤组织的凋亡指数和Caspase-3活力的差异有显著性,低剂量组凋亡指数和Caspase-3活力的综合评分分别为(1.84±0.74)和(1.16±0.38),高剂量组分别为(9.00±1.37)和(4.36±0.57),TCE浓度越高,细胞凋亡和Caspase-3的表达水平越高.结论 TCE染毒后短期可引起皮肤组织的细胞凋亡,细胞凋亡在皮肤组织损伤作用的机制中具有重要的意义.
