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基因芯片技术及其在结核分支杆菌研究中的应用
一、基因芯片技术概述基因芯片(又称DNA芯片)始创于90年代初,首先由美国Affymetrix公司的Fodor博士提出并开始基因芯片技术的研究.它是目前分子生物学前沿的方法,是物理学、微电子学与生命科学交叉综合的高新技术,是近年来发展起来的进行大规模遗传多态性检测的新方法[1].基因芯片以其基片的不同分为无机基片和有机合成物基片,前者包括半导体硅片和玻璃片,其上的探针主要以原位聚合的方法合成;而后者的探针是预先合成后通过特殊的微量点样装置或仅器滴加到基片上去[2].基因芯片的基本原理是将多种探针固定在玻璃等基片上,然后与待测样本的DNA或RNA进行杂交,通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息.由于该法同时将大量探针固定于支持物上,所以一次可以对样品大量序列进行检测和分析,从而解决了传统核酸印迹技术的操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足[3].
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氯氰菊酯微胶囊剂的制备
目的:探讨以脲醛树脂为壁材,以氯氰菊酯为囊芯物制备聚脲微胶囊的工艺条件.方法:采用原位聚合法制备聚脲微胶囊,对比不同反应时间、搅拌速度、反应温度、催化剂对微囊化的影响.结果:通过实验得知,在反应温度60～70 ℃,搅拌速度3 000 r/min,以NH4Cl缓慢调节pH值为2.0左右,酸化时间2 h的反应条件下,可获得大小及分布理想的微囊颗粒.结论:氯氰菊酯聚脲微胶囊技术成功实现了农药由液态向固态的转变,使得药物的配制和施用更加方便、快捷,并为有害生物防治产品的多样化提供了可能.
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麻黄碱分子印迹整体柱的制备
目的:合成对麻黄碱具有特异识别能力的分子印迹聚合物整体柱.方法:以麻黄碱为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二酸二甲基丙烯酸酯作为交联剂,以甲苯和十二醇混合溶液为致孔剂,用原位分子印迹技术,合成了麻黄碱分子印迹聚合物整体柱.结果:通过优化合成条件,结果显示模板分子、功能单体与交联剂之间的比例以1∶2为佳,致孔剂中甲苯的佳含量为20～25%(v/v);合成温度和合成时间分别为50℃和12 h.通过扫描电镜和孔径分布曲线对得到的麻黄碱分子印迹聚合物进行了表征,结果显示聚合物中存在三种孔结构.在此基础上,研究了整体柱在有机相和水相中的识别能力.结论:得到的分子印迹聚合物整体柱,对模板分子具有特异的识别能力,在优化色谱条件下,麻黄碱和伪麻黄碱可以得到较好的分离.
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罗丹明B分子印迹毛细管整体柱的制备及应用
目的:制备及表征罗丹明B分子印迹毛细管整体柱并用于样品检测.方法:采用新型三元混合致孔剂,经紫外光引发、原位聚合制备罗丹明B分子印迹固相微萃取毛细管整体柱,用蠕动泵在一定的压力下洗脱模板分子,考察制备及洗脱过程中的主要因素;采用HPLC法对柱性能进行表征.色谱条件:色谱柱为Acclaim 120 C18柱(5 μm,4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-水(75∶ 25),流速0.6 mL·min-1,检测波长550 nm;对市售辣椒样品中的罗丹明B进行测量.结果:探索并确定了该柱的合成、洗脱及应用条件,实际样品测量的回收率介于102％ ～ 109％.结论:该柱对罗丹明B具有高灵敏度及选择性,可以对罗丹明B样品进行简单、高效的前处理.
