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siRNA靶向干扰KLF17对结直肠癌细胞株SW480增殖和迁移的影响
目的 利用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术探究体外沉默Krüppel样因子17(Krüppel like factor 17,KLF17)的基因表达对结直肠癌细胞株SW480细胞增殖和迁移的影响,为抑制结直肠癌复发转移奠定理论基础、方法 使用基因重组方法构建LF17的siRNA真核质粒表达载体,用电转染法转染至人结直肠癌SW480细胞中.使用荧光定量PCR检测KLF17、E-钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的基因表达水平;用Western blot 检测KLF17的蛋白表达以及细胞转移相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达.用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖活性.结果 与对照组相比,转染siRNA后的SW480细胞培养48 h后增殖能力受到显著抑制,且细胞形态由圆形或多边形变成梭形并向外伸出多个细胞突起;转染siRNA后KLF17和E-cadherin蛋白表达以及基因表达水平显著降低,Vimentin的蛋白表达水平和基因表达水平显著升高.结论 抑制KLF17的表达可以通过诱导结直肠癌细胞发生上皮-间质转化而促进其细胞的增殖以及转移.
关键词： 结直肠癌 Krüppel样因子17 上皮-间质转化 侵袭 -
Krüppel样因子17抑制肾癌786-0细胞迁移和侵袭及机制
目的 探讨Krüppel样因子17(KLF17)是否通过调控上皮-间充质转化(EMT)抑制786-0细胞的迁移侵袭能力.方法 设计并合成特异性小干扰RNA(siRNA)下调肾癌细胞株786-0中KLF17的表达,并利用划痕实验及Transwell实验检测其迁移侵袭能力的变化,通过Western blot检测EMT相关分子表达水平变化.结果 siRNA能有效下调肾癌786-0细胞株中KLF17的蛋白及mRNA的表达量.细胞划痕实验结果显示下调KLF17表达后,细胞迁移能力增强(P＜0.01);Transwell实验中阴性对照组穿膜细胞数为(18.16±2.21)个,而siRNA1组为(29.03 ±2.48)个(P＜0.01),siRNA2组为(28.93 ±3.00)个(P＜0.01).KLF17-siRNA介导的基因沉默下凋了上皮细胞表面标记E-钙黏蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达,上调了间充质干细胞表面标记N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达.结论 KLF17可通过调节EMT的进程影响肾癌细胞的迁移侵袭能力.
关键词： 肾癌 Krüppel样因子17 迁移 侵袭 上皮-间充质转化 -
结直肠癌组织中Krüppel样因子17的表达及其与预后的关系
目的 研究Krüppel样因子17(Krüppel-like factor 17,KLF17)在结直肠癌组织中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系.方法 收集武汉市第一医院128例结直肠癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学法检测KLF17在结直肠癌及对应的非癌结直肠黏膜组织中的表达,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox比例风险模型进行生存分析.结果 128例结直肠癌中,83例癌组织存在KLF17低表达.KLF17低表达与结直肠癌患者淋巴结转移相关(P=0.012).KLF17低表达患者5年无病生存率及总生存率分别为46.3％和49.3％,明显低于KLF17高表达患者的78.3％和82.0％(P均=0.001).Cox模型分析结果显示:KLF17、术前肠梗阻、肿瘤分化程度和病理学N分期是结直肠癌患者无病生存时间及总生存时间的独立预后因素(P均＜ 0.05).结论 KLF17低表达与结直肠癌淋巴结转移相关,是结直肠癌患者预后不良的一个潜在分子指标.
关键词： 结直肠癌 预后 Krüppel样因子17 肠梗阻 免疫组织化学 -
KLF17 对裸鼠移植瘤生长的影响及其在体调控靶基因的筛选和功能分析
目的:研究Krüppel样因子17(Krüppel-like factor 17,KLF17)在裸鼠移植瘤中的作用并分析KLF17在体调控的靶基因及其功能和参与的信号通路.方法:慢病毒转染技术稳定上调人肺腺癌A549细胞及下调人肺腺癌H322细胞中KLF17的表达.11只BLAB/c nu/nu裸鼠分为上调组5只和下调组6只,分别通过左、右侧躯体皮下注射KLF17上调和下调的相应细胞及其对照细胞,观察KLF17对裸鼠移植瘤生长的影响;Real-time PCR及免疫组织化学染色分析裸鼠移植瘤组织中KLF17 mRNA及蛋白的表达,转录组测序技术分析上调KLF17表达后裸鼠移植瘤中差异表达的基因,通过The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库分析KLF17调控的差异基因的功能,Gene Ontology 和KEGG PATHWAY 富集分析差异基因的功能和可能参与的信号通路.结果:上调A549细胞中KLF17的表达后,其裸鼠移植瘤生长速率显著低于空载体对照组(P<0.05),下调H322细胞中KLF17表达后,其裸鼠移植瘤生长速率及移植瘤重量均显著高于空载体对照组(P<0.01, P<0.05).在裸鼠移植瘤组织中,过表达组KLF17 mRNA及蛋白显著高于对照空载体组.转录组测序结果显示KLF17可能调控的基因有ras基因同源家族成员V(ras homolog family member V,RHOV)和冠蛋白1C(coronin 1C,CORO1C)等.TCGA数据库中肺腺癌患者10年累计生存时间在RHOV和CORO1C mRNA不同表达组明显不同,高表达RHOV及CORO1C的肺腺癌患者生存时间显著低于其低表达组.Gene Ontology 和KEGG PATHWAY富集分析提示KLF17调控的靶基因(差异基因)可能与肿瘤细胞的刺激应答、生长及黏附有关,并且参与了细胞趋化性、黏附及细胞外基质受体相关的信号通路.结论:KLF17抑制裸鼠移植瘤的生长,并下调RHOV和CORO1C等癌基因,参与调控肿瘤黏附及生长相关信号通路.
关键词： Krüppel样因子17 肺腺癌 裸鼠 移植瘤 基因调控
