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重组腺相关病毒介导的RNA干扰对乙型肝炎病毒复制和表达的影响
目的:观察以重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制和表达的影响.方法:将hu6驱动的shRNA表达框置于腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的2个ITR(inverted terminal repeat,ITR)之间,之后接有HBV的基本核心启动子(bacic core promoter,BCP)及其驱动的AAV的Rep基因,构成rAAV,作为抗HBV的shRNA表达框的质粒载体,转染HepG2.2.15细胞(肝细胞性肝癌细胞插入乙型肝炎病毒基因),测定上清液中第1天、第2天、第3天及第10天HBsAg、HBeAg 表达及HBV DNA拷贝数,并对细胞基因组AAVS1区域进行测序.结果:成功构建了含目的序列的rAAV质粒载体PLRBR322-324、PLRBR522-324、PLRBR322-2424、PLRBR522-2424.体外质粒转染细胞实验显示4个载体对HBsA g、HBeAg表达及HBV DNA复制均有抑制效应,且前两者对HBsAg高一些、后两者对HBeAg高一些,第3个对HBV DNA拷贝数高一些.转染后第3天后抑制效应明显,第10天抑制率仍较高.针对细胞基因组AAVSl区域测序结果显示,目的序列定点整合于该区域.结论:利用AAV和HBV各种元件构建的rAAV,作为抗HBV的shRNA表达框的载体,借助Rep蛋白介导的定点整合作用,为解决RNAi抗HBV作用时间短暂的问题做了一些技术上的探索.
关键词： RNA干扰 短发夹RNA rAAV HepG2.2.15细胞 定点整合 -
rAAV-IGF-I诱导大鼠下颌髁突生长发育的实验研究
目的 评价局部注射重组腺相关病毒介导胰岛素样生长因子-I(rAAV-IGF-I)对大鼠下颌髁突生长发育的影响.方法 选用5周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠20只,随机分为4组.在每只大鼠的左侧颞下颌关节腔内注射rAAV-IGF-I,右侧关节腔内注射生理盐水.手术后2周、4周、8周及12周后分别处死并取出下颌骨,拍摄两侧下颌骨的数码照片进行测量比较.结果 实验组下颌髁突长度、髁突头宽度、髁突头中点及髁突头下点到下颌平面的距离从实验4周时出现明显差异.实验组下颌骨的长度及髁突前点到下颌平面的距离在实验8周及12周中明显长于对照组.4周及8周时实验组髁突长轴与下颌平面的夹角均大于对照组.结论 局部注射rAAV-IGF-I能够促进大鼠下颌骨长度及高度的增加,为治疗下颌发育不足提供了新的方法.
