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三阴性乳腺癌原代细胞的培养及其特异性结合肽的筛选
目的：利用噬菌体肽库筛选技术获得与三阴性乳腺癌原代细胞特异性结合的多肽，为探索三阴性乳腺癌的治疗靶点提供试验支持。方法从三阴性乳腺癌新鲜组织分离、培养原代癌细胞并以其为靶细胞，以hs578bst人正常乳腺细胞为吸附细胞，对噬菌体随机十二肽库进行三轮减性筛选；随机挑取15株富集后的噬菌体单克隆，ELISA及DAB染色鉴定噬菌体克隆的亲和力及特异性，并对阳性噬菌体单克隆测序。结果经过3轮筛选，噬菌体克隆得以明显富集，随机挑取的15株噬菌体单克隆中有11株为阳性，ELISA及DAB鉴定发现，5号噬菌体（phage-5）对靶细胞亲和力及特异性强，经DNA测序和推导，其多肽序列为PHETLTSFVRRG。结论从噬菌体随机十二肽库中成功筛选出与三阴性乳腺癌原代细胞特异性结合的多肽，该多肽可能作为三阴性乳腺癌靶向治疗药物的载体。
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肝癌特异性噬菌体多肽的筛选和初步鉴定
目的 利用噬菌体展示肽库筛选与肝癌HepG2细胞特异性结合的多肽,为筛选及明确新的肝癌早期诊断和治疗标志物打下基础.方法 以肝癌细胞HepG2为靶细胞,LO-2为吸附细胞,在37℃条件下对噬菌体随机12肽库进行多轮减性筛选,挑取单克隆扩增并鉴定.利用ELISA初步鉴定克隆亲和力,测定阳性克隆DNA测序并进行同源性及氨基酸分析.结果 经过3轮减性筛选发现,随机挑选的30个单克隆中,其中ZS-9对HepG2具有较高亲和力,氨基酸测序结果表明,该序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBankDNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性,而且,国内外文献均未见报道,表明笔者筛选到一新的肝癌相关抗原的配体.结论 利用噬菌体随机12肽库成功筛选到与肝癌细胞HepG2具有较高亲和力的多肽,为筛选鉴定新的肝癌特异的标志物奠定工作基础,也为肝癌的早期诊断和靶向治疗进一步研发确定了靶标.
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肺癌特异性结合多肽的体外筛选和鉴定
目的 应用噬菌体随机肽库技术筛选出与肺癌细胞特异性结合的多肽.方法 以人肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,人胚肺细胞MRC-5为吸附细胞,对噬菌体随机12肽库进行3轮全细胞减性筛选后,随机挑取噬菌体克隆进行ELISA鉴定;对亲和力较高的阳性克隆进行DNA测序并翻译为氨基酸序列;化学合成异硫氰酸荧光素标记的多肽(FITC-ZS-5),采用细胞和组织免疫荧光法鉴定FITC-ZS-5与肺癌细胞的亲和力及特异性.结果 通过3轮减性筛选后,与NCI-H1299细胞结合的噬菌体克隆得到有效的富集:ELISA结果显示5号克隆对CI-H1299细胞亲和力高,将其命名为Phage ZS-5:测序结果显示Phage ZS-5所表达的多肽序列在国内外均未见报道,细胞及组织免疫荧光实验结果显示FITC-ZS-5 对肺癌细胞及组织具有较高的亲和力和特异性.结论 应用噬菌体随机肽库技术筛选到肺癌靶向性多肽ZS-5,为肺癌的靶向治疗和诊断奠定基础.
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利用肺癌特异性结合多肽ZS-6筛选肺癌相关标志物
目的 利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-6从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础.方法 以生物素标记的十二肽ZS-6为探针,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过四轮减性筛选后,挑取与ZS-6特异性结合的噬菌体单克隆、扩增、纯化,再通过PCR技术扩增、产物纯化后,进行DNA测序,测序结果经过生物信息学分析.结果 筛选出18个与ZS-6特异性结合的噬菌体克隆,测序结果显示其中1个为未知功能的新基因,其余的均已确定为肿瘤相关基因.结论 从人类肺癌cDNA噬菌体展示文库中筛选出潜在的肺癌肿瘤标志物,为肺癌的早期诊治奠定基础.
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噬菌体随机肽库淘选肺癌细胞NCI-H1299特异性结合多肽
目的 利用噬菌体展示肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础.方法 以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肽库进行三轮减性筛选,挑取单克隆ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,鉴定多肽的亲和力及特异性.结果 经ELISA初步鉴定,随机挑选的20个单克隆中,其中6号对NCI-H1299亲和力高,将其命名为Phage ZS 6.细胞免疫荧光试验进一步证明,合成的相应多肽FITCZS 6对NCI-H1299具有高亲和力.结论 利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZS 6,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础.
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噬菌体展示肽库在乳腺癌血清肿瘤标志物筛选中的应用
目的 用噬菌体随机12肽库对乳腺癌患者的血清进行差异性筛选,以获得乳腺癌特异性的新的肿瘤标志物. 方法 对噬菌体随机12肽库进行三轮差异性筛选,用ELISA法测定噬菌体克隆对乳腺癌患者血清结合的特异性.结果 经过三轮筛选,噬菌体富集率逐轮递增,经47例乳腺癌患者和正常人血清的ELISA法检测验证,获得一株与乳腺癌患者血清特异较好的噬菌体,经DNA测序和推导,其短肽序列为短肽(QVSAEHKVQGFW).结论 成功筛选到能与乳腺癌患者血清高亲和力特异结合的12肽序列,为今后研究乳腺癌肿瘤标志物奠定了基础.
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从噬菌体随机肽库中筛选及鉴定肺癌特异性多肽
目的 利用Phage display随机肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,并通过ELISA和免疫组化鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础.方法 以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肤库进行四轮减性筛选,挑取单克隆、扩增纯化噬菌体、并经ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;对阳性克隆提取质粒,浏序后合成多肤,多肽标记荧光素FITC,以其在肺癌组织芯片上鉴定多肽的亲和力及特异性.结果 经ELISA初步鏊定,随机挑选的18个单克隆中,其中3号对NCI-H1299亲和力高,将其命名为Phage ZL-3.细胞免疫荧光试验进一步证明,荧光素标记的多肽FITC-ZL-3对NCI-H1299具有高亲和力.结论 利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZL-3,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础.
