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突变特异性扩增系统和变性高效液相色谱分析法结合DNA测序法快速产前诊断黏多糖贮积症Ⅱ型高危胎儿
目的 为了快速、准确地对黏多糖贮积症Ⅱ型(MPSⅡ)高危胎儿做出产前基因诊断,从而及时而高效地防止病胎的出生.方法 在阐明先证者病因及其父母基因型的基础上,采用已建立的突变特异性扩增系统(ARMS)特异引物直接鉴定法、变性高效液相色谱(DHPLC)快速筛检法,结合DNA 序列分析法,对已孕20 周的高危胎儿的艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)基因相应突变位点进行快速检测和鉴定.由于MPSⅡ为XR 病,故又用SRY 引物对胎儿进行性别鉴定,以避免可能出现的母血污染而导致的误诊.结果 所怀胎儿未获得母源性的c.1344 del A 突变,是1 例基因型完全正常的女胎.后经随访和复检,证实所生小孩的基因型、表现型都与产前诊断结果完全一致.结论 ARMS 特异引物直接鉴定法、DHPLC 快速筛检法结合DNA 序列分析法是快速、准确产前诊断MPSⅡ高危胎儿的有效方法.其中,所建立的ARMS 和DHPLC 方法,既快速特异,又简便经济,可在一天之内送报结果,特别适用于已明确病因的高危胎儿的早期诊断以及正常组和患者试验组的快速鉴别.这一产前基因诊断工作的成功实施为今后继续开展本病以及其他相关遗传病的遗传咨询、基因诊断和产前诊断积累了宝贵的经验,也为今后开展植入前遗传学诊断等打下较好的基础.
关键词： 黏多糖累积病Ⅱ型 产前诊断 艾杜糖-2-硫酸酯酶 IDS基因 -
黏多糖贮积症Ⅱ型家系IDS基因突变分析及产前诊断
目的 对1个黏多糖贮积症Ⅱ型(MPSⅡ)家系的IDS基因进行基因突变分析,并对家系中的高危胎儿进行产前诊断.方法 2012年3月收集1例MPSⅡ先证者,应用PCR扩增和直接双向测序技术对其MPSⅡ家系中的2例患者(包括先证者)及其母亲和5例表型正常家系成员的IDS基因进行基因突变分析,基因突变确定后,对家系中的孕11周胎儿抽取绒毛标本进行产前诊断.结果 家系中的2例患者均检测出IDS基因第344碱基对缺失了A(c.344delA)缺失突变,患者母亲携带IDS基因c.344delA杂合缺失突变;正常表型家系成员未检出此突变.胎儿携带IDS基因c.344delA杂合缺失突变,为女性携带者.结论 IDS基因c.344delA缺失突变是该MPSⅡ家系的致病原因,通过产前诊断避免此类患儿出生是目前预防该病发生的有效方法.
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八个黏多糖贮积症Ⅱ型家系IDS基因变异分析与产前诊断
目的 对8个黏多糖贮积症Ⅱ型(mucopolysaccharidosis type Ⅱ,MPS Ⅱ)家系艾杜糖-2硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase,IDS)基因进行基因变异分析,并对其中3个家系的胎儿进行产前诊断,避免MPSⅡ患儿出生. 方法 聚合酶链反应扩增后,应用Sanger测序及多重连接依赖探针扩增方法,对MPSⅡ家系中先证者及其母亲的IDS基因外显子序列及侧翼内含子区进行基因变异分析.对家系中高危胎儿抽取绒毛/羊水细胞培养,测定其IDS酶活性;并抽取基因组DNA进行胎儿性别鉴定和IDS基因变异检测. 结果 8个家系中共检测出8种IDS基因变异,分别为p.Asp46Asn、p.Arg88Cys、p.N115fs*15、p.Gln121Arg、p.Trp153Arg、1VS4+1G＞C、IVS6-1G＞A及E4～6大片段缺失,其中p.Asp46Asn、p.Trp153Arg和IVS4+1G＞C为新变异.2例胎儿羊水细胞IDS酶活性均明显下降,基因测序均发现IDS基因变异半合子,性别为男性,家属选择终止妊娠;另1例胎儿为IDS基因变异携带者,性别为女性,生后未见异常. 结论 胎儿羊水/绒毛细胞IDS酶活性测定结合IDS基因变异分析是一种准确、可靠的产前诊断方法,可避免MPS Ⅱ患儿的出生.
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黏多糖贮积症Ⅱ型一家系IDS基因分析及产前诊断
目的 确定黏多糖贮积症Ⅱ型(Mucopolysaccharidosis type Ⅱ,MPS Ⅱ)一家系的致病基因突变,并对高危胎儿进行产前诊断.方法 应用聚合酶链反应和直接测序的方法,对先证者、胎儿及部分家系成员艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase,IDS)基因的所有外显子及其与内含子交界处序列进行检测;对测序发现的性质未知的碱基改变采用高效液相色谱技术(denatruring high-performance liquid chromatography,DHPLC)在正常人群中进行筛查.结果 检测到先证者IDS基因3个碱基改变:5号外显子c.684A>G,6号外显子c.851C>T,7号外显子c.892C>T;先证者母亲和外祖母的IDS基因存在c.684A>G杂合改变,c.851C>T杂合改变及c.892C>T杂合改变;100例家系外正常男性未发现IDS基因5号外显子c.684A>G和6号外显子c.851C>T的碱基改变;胎儿基因型与先证者相同.结论 IDS基因c.892C>T突变是该MPS Ⅱ患者的主要致病原因;产前诊断证明胎儿为男性患病胎儿.
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黏多糖贮积症Ⅱ型的诊断与产前诊断
目的 建立用荧光底物测定艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)活性的方法,应用该方法对黏多糖贮积症Ⅱ型(MPSⅡ)病例进行临床鉴别诊断,对高危妊娠的孕妇进行产前诊断.方法 采用人工合成的荧光底物4-甲基伞形酮-α-艾杜糖苷-2-硫酸,测定MPSⅡ疑似患儿血浆中IDS活性,并用绒毛或经培养的羊水细胞为检材,对高危妊娠的孕妇进行产前诊断.同时观察孕妇血浆IDS活性变化,用基因诊断方法检测胎儿性别.结果 获得中国正常人IDS活性正常值:血浆中为240.2～668.2 nmol/(4 h·ml),绒毛组织为37.2～54.9 nmol/(4 h·mg蛋白),经培养的羊水细胞为21.4～74.4 nmol/(4 h·mg蛋白);患者血浆的IDS活性为0.3～18.6 nmol/(4 h·ml),肯定杂合子的血浆酶活性为88.7～547.9 nmol/(4 h·ml).在50例疑似患儿中确诊了46例MPSⅡ患者.10例产前诊断中检出4例男性胎儿患病,5例为女性胎儿.结论 荧光法测定IDS活性是敏感、可靠、快速的方法,可用于病例鉴别诊断及孕早期MPSⅡ高危妊娠的产前诊断.
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Ⅱ型黏多粮贮积症一家系IDS基因突变分析
1临床资料
1.1病例资料先证者（Ⅳ：3）男，6岁，汉族，第2胎第2产，足月顺产，产程顺利。患儿2岁后出现反应迟钝，智力低下，走路不稳，语言功能低下等症状，且渐行性加重；体检：患儿身高1.2 m，体质量20 kg，皮肤粗糙，质感较硬，毛发浓密，前额凸出，眉毛厚重，眼距较宽，鼻梁低，呼吸正常，耳大，听力正常，角膜稍混浊，目光呆滞，视力较弱，口型宽大，牙齿稀疏，颈短脖粗，见图1A（见封三）。X线检查结果示患儿全身骨骼发育尚正常，胸腹部超声未显示异常。南京市儿童医院尿检初步诊断为Ⅱ型黏多糖贮积症（mucopolysaccharidosisⅡ，MPSⅡ）。患儿父母表型正常，非近亲结婚。
1.2家系调查家族4代，2例患者均为男性，即先证者（Ⅳ：3）及先证者之舅舅（Ⅲ：1），2例患者临床表型相似，Ⅲ：1于13岁时因心力衰竭夭亡。该家系中女性成员表型正常。见图1B （见封三）。
1.3遗传诊断通过聚合酶链反应（PCR）和直接测序的方法，对MPSⅡ致病基因艾杜糖-2-硫酸酯酶（iduronate-2-sulfatase，IDS）外显子及其侧翼序列进行突变分析，发现先证者（Ⅳ：3）IDS基因外显子3存在c.335-336insA突变。女性Ⅲ：3、Ⅲ：5均携带IDS基因3号外显子c.335-336insA杂合突变，男性Ⅱ：3未见基因突变。
