首页 > 文献资料
-
人KIAA1199蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定
目的 KIAA1199是一种功能未知的胞浆蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础.方法 采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pMAL-C2X和pGEX-5X-1原核表达载体中.经IPTG诱导后,重组质粒pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199,分别表达含麦芽糖结合蛋白(MBP)的MBP-KIAA1199融合蛋白和含重组谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白GST-KIAA1199.其中,MBP-KIAA1199融合蛋白经纯化后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体；GST-KIAA1199融合蛋白用于检测抗体特异性.此后应用ELISA及Western blot方法鉴定该抗体.结果 pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199两个重组质粒构建成功,并获得了高效价的特异性多克隆抗体.结论 成功制备了KIAA1199抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础.
-
重组人肝再生因子可溶性表达及活性鉴定
目的 探索重组人肝细胞生成素Cn(HPPCn)蛋白可溶性表达方法和纯化工艺,提高其比活性和蛋白产量,为发展新的急性肝病治疗药物奠定基础.方法 利用分子生物学方法构建4个HPPCn原核表达载体,分别与不同的分子伴侣融合表达,助其表达后正确折叠.利用亲和层析方法纯化获得的融合蛋白,MTS法检测所得重组蛋白促进细胞增殖活性.结果 成功构建了4个HPPCn表达载体,其中pMBP-P-HPPCn实现了rhHPPCn的可溶性表达.结论 首次建立了重组HPPCn蛋白的可溶性生产方法,并对其蛋白活性进行分析和鉴定.
-
人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达
目的:在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabies MBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析.方法:利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coli ER2566,IPTG诱导表达.表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、Amylose Resin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性.结果:成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白.ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高.结论:抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究.
关键词： 抗狂犬病毒二硫键稳定抗体 MBP融合蛋白 原核表达
