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聚酰胺-胺型树状高聚物介导短发卡RNA转染小鼠腹膜组织的实验研究
目的 研究聚酰胺-胺型树状高聚物(PAMAM)载体介导pHK-shRNA质粒在小鼠腹膜组织的表达情况.方法 将昆明小鼠随机分为转染组和对照组,分别经腹腔注射PAMAM G9/pHK-shRNA复合物或生理盐水,于24h、48h、96h和168h留取壁层和脏层腹膜组织,在荧光显微镜下观察壁层腹膜绿色荧光蛋白(GFP)的表达,同时采用Western Blot检测脏层腹膜GFP的表达.结果 正常对照组的小鼠腹膜组织未能检测到GFP表达,而PAMAM G9/pHK-shRNA转染组的各时间点均可检测到GFP表达,以48h表达强,显著高于其他各时间点(P＜0.01).Western Blot结果与冰冻组织切片的结果一致.结论 PAMAM载体可介导pHK-shRNA转染正常小鼠的腹膜组织,为进一步体内研究提供实验依据.
关键词： 聚酰胺-胺型树状高聚物 腹膜组织 转染 -
聚酰胺-胺型树状高聚物介导CTGF-shRNA转染自发性高血压大鼠心肌组织的实验研究
目的 研究聚酰胺- 胺型树状高聚物(PAMAM)载体介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(pCTGFshRNA)质粒对自发性高血压大鼠心肌纤维化因子表达的影响.方法 设计并构建质粒pCTGF-shRNA 和阴性对照pHK-shRNA,利用酶切和测序验证序列.将24 只自发性高血压大鼠分为pCTGF-shRNA 转染组、pHK-shRNA转染组和对照组,分别应用G9 PAMAM 将质粒转染至大鼠心肌组织.定期测量血压变化,4 周后处死大鼠留取心肌和血液标本.通过称量计算左室质量/ 体质量(LVM/BM)反应左室肥厚程度,RT-PCR 和 Western blot 检测心肌组织 CTGF 和TGF-β的 mRNA 和蛋白表达,免疫组化技术分析 CTGF、TGF-β和层连蛋白(LN)的表达.结果 干预4 周后,pCTGF-shRNA 转染组、pHK-shRNA 转染组和对照组的血压分别为196±5.7mmHg、199±2.6mmHg 和196±6.8 mmHg,无显著性差异 ( P > 0.05),三组的左室肥厚程度也无统计学差异(P>0.05).自发性高血压大鼠有基础水平的CTGF 表达,pCTGF-shRNA 转染组的CTGF 的mRNA 和蛋白表达均明显低于对照组和pHK-shRNA 转染组(P<0.05),而pHK-shRNA 与对照组无显著性差异(P>0.05).三组的TGF-β1 的mRNA 和蛋白表达无显著性差异(P>0.05).免疫组化结果显示,pCTGF-shRNA 转染组的CTGF、LN 表达均明显低于其他2 组,但TGF-β1 表达无统计学差异.结论 PAMAM 载体成功介导pCTGF-shRNA 转染自发性高血压大鼠,能降低心肌组织CTGF 及LN 的表达,提示PAMAM 介导的pCTGF-shRNA 可有效地用于心肌纤维化的基因治疗.
关键词： 内科学 聚酰胺-胺型树状高聚物 自发性高血压大鼠 shRNA 结缔组织生长因子
