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尿毒症血清活化Notch信号通路调控血管平滑肌细胞表型转化
目的 研究尿毒症血清对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化影响,探讨动静脉内瘘(arteriovenous fistula,AVF)狭窄及失功的机制. 方法 ①弹性纤维染色(elastic-Van Gieson staining,EVG)比较内膜厚度,免疫组化法观察α-SMA、FSP-1、PCNA的表达;②培养人主动脉平滑肌细胞株(human aortic smooth muscle cells,HASMCs),分为无血清组(control,Ctl)、10％正常血清组(normal serum group,NS)、5％～20％尿毒症血清组(uremia serum group,US),检测平滑肌细胞α-SMA、SMMHC、SM22 α、FSP-1、PCNA的表达;③Western blot检测各组平滑肌细胞N1ICD蛋白的表达,QPCR检测细胞Notch1-3、Hes1、Hes5的mRNA表达,并比较Notch信号抑制剂DAPT预处理24h对细胞SM22 α、SMMHC、FSP-1、PCNA、Hes1的mRNA表达的影响;④免疫组化染色检测Jagged1的表达,ELISA法检测人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Jagged1的表达,并用Western blot法检测HASMCs的Jagged1蛋白表达. 结果 ①内瘘内膜显著增厚,增生内膜α-SMA呈阳性表达;与正常血管比较,增生内膜FSP-1、PCNA阳性表达增加,差异均有统计学意义(FSP-1:Ctl-A:P=0.024,Ctl-V:P=0.011;PCNA:Ctl-A:P=-0.002;Ctl-V:P=0.005);②与10％NS组相比,10％US组细胞α-SMA、SM22α蛋白表达下降,而FSP-1、PCNA蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P=0.002;P=-0.001;P=0.001;P＜0.001),且上述指标与尿毒症血清呈浓度依赖性;10％US组细胞SM22 α、SMMHC的mRNA表达下降,而FSP-1、PCNA的mRNA表达增加,差异有统计学意义(P=0.014;P=-0.003;P=0.045;P=0.001);③与10％NS组比较,10％US组细胞N1/CD蛋白的表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.001);10％US组细胞Notch 1,3、Hes 1、Hes 5的mRNA表达增加,差异有统计学意义(P值分别为＜0.001,0.025,＜0.001,0.035),Notch2的表达无统计学差异(P=0.907);DAPT预处理可上调SM22 α、SMMHC的mRNA表达,下调FSP-1、PCNA及Hes1的mRNA表达,差异均有统计学意义(P=0.003;P=0.020;P=0.036;P=0.009;P＜0.001);④内瘘组织Jagged1的表达增加,主要位于增生内膜;与10％NS组相比,10％US组HASMCs及HUVEC的Jagged1蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(P值分别为0.001,0.005). 结论 尿毒症血清通过上调配体Jagged1的表达,激活Notch信号通路,促进VSMC表型由收缩型向合成型转变,可能是AVF内膜增生的机制之一.
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高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响
目的高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法来观察高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响.结果高糖、尿毒症血清组VEGF表达明显高于正常对照组.结论高糖、尿毒症血清可促进人腹膜间皮细胞VEGF的表达,可能导致腹膜新生血管的形成,从而引起腹膜超滤衰竭.
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左卡尼汀抑制尿毒症血清诱导的红细胞衰亡
目的：探讨左卡尼汀对尿毒症患者红细胞的保护作用及机制。方法：将2％健康人红细胞悬液在以下3组不同的体外培养液中孵育：对照组（C组）、尿毒症血清组（U组）和尿毒症血清＋左卡尼汀组（L组）。分别在孵育24和48 h时，留取红细胞，使用流式细胞术检测红细胞衰亡（用磷脂酰丝氨酸表达率代表红细胞衰亡）和红细胞活性氧簇（ ROS）的含量，并采用酶联免疫法检测红细胞谷胱甘肽（ GSH）的含量。结果：红细胞衰亡随孵育时间延长而增加，U组较C组明显增加，L组较U组明显降低。 U组的红细胞ROS生成较C组明显增加，而红细胞GSH生成明显减少。 L组的红细胞ROS生成较U组明显减少，而GSH生成明显增加。结论：尿毒症血清诱导正常红细胞加速衰亡，且衰亡率具有时间依赖性。而左卡尼汀可以抑制尿毒症血清诱导的红细胞衰亡，其机制可能与抗氧化有关。
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促红细胞生成素治疗肾性贫血的临床研究进展
任何肾脏疾病发展到肾功能衰竭阶段(end stage renaldisease,ESRD)都可发生贫血.贫血主要机制为肾脏产生促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)绝对或相对不足,红细胞寿命缩短,尿毒症血清中一些毒性物质干扰红细胞的生成和代谢等[1,2].
