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脉冲电磁场对卵巢切除大鼠骨组织活化T细胞核因子2和空泡型V-ATP酶mRNA表达的影响
目的:探讨脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fileds,PEMF)对卵巢切除(ovariectomized,OVX)大鼠骨组织细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK),活化T细胞核因子2(nuclear factor of activated T2,NFAT2)和空泡型V-ATP酶(vavcuolar H+-ATPase,V-ATP)表达的影响.方法:将48只SD大鼠随机分为假手术组(SHAM),卵巢切除组(OVX),卵巢切除+脉冲电磁场治疗组(OVX+PEMF).OVX+PEMF组大鼠在频率8Hz,磁场强度3.8mT的PEMF下每天干预40min,干预8周和16周后检测大鼠骨密度和骨组织RANK,NFAT2和V-ATP的mRNA表达水平.结果:OVX组BMD在第8周(P＜0.05)和第16周(P＜0.001)均低于SHAM组.SHAM组与OVX组比较,8周时RANK表达P＞0.05,而SHAM组NFAT2与V-ATP表达均低于OVX组(P＜0.05,P＜0.01);16周时RANK、NFAT2、V-ATP在OVX组表达升高(均P＜0.01).SHAM组与OVX+PEMF组比较,8周时两组RANK、NFAT2、V-ATP表达P＞0.05;16周时OVX+PEMF组RANK和NFAT2表达均高于SHAM组(均P＜0.01),而两组V-ATP表达P＞0.05.OVX组与OVX+PEMF组相比,8周时两组RANK和V-ATP表达均P＞0.05,OVX+PEMF组NFAT2表达低于OVX组(P＜0.05);第16周时两组RANK表达P＞0.05,NFAT2和V-ATP在OVX+PEMF组的表达均下降(P＜0.01,P＜0.05).结论:PEMF可通过下调OVX大鼠骨组织中NFAT2和V-ATPmRNA的表达从而抑制破骨细胞的骨吸收,进而延缓OVX大鼠的骨丢失.
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巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系CAII、NFAT2mRNA表达的影响
目的 探讨不同浓度巴戟天含药血清对体外培养成骨-破骨细胞共育体系中碳酸酐酶II(CAII)、活化T细胞核因子(NFAT2)mRNA表达的影响.方法 取24 h内新生SD乳鼠头盖骨分离培养成骨细胞,取5周龄SD大鼠四肢长骨骨髓基质细胞,加入集落细胞刺激因子(M-CSF)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞.采用ALP染色鉴定成骨细胞,TRAP染色、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色、电镜等扫描鉴定破骨细胞,体外建立成骨-破骨细胞共育体系,设置高、中、低3种浓度巴戟天含药血清组和对照组,干预3d后提取各组总RNA,应用Real Time PCR(RT-PCR)方法测定各组CAII、NFAT2mRNA表达并进行统计学分析.结果 不同浓度巴戟天含药大鼠血清对成骨-破骨细胞共育体系CAII、NFAT2 mRNA的表达均有抑制作用,且其抑制作用表现出一定的浓度依赖性;各组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 巴戟天含药血清可抑制成骨-破骨细胞共育体系CAII、NFAT2mRNA表达,从而达到降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性.
关键词： 巴戟天 成骨-破骨细胞共育体系 碳酸酐酶II 活化T细胞核因子2 -
活化T细胞核因子2可抑制高迁移率蛋白1的释放
目的 探讨活化T细胞核因子2(NFAT2)对炎症因子高迁移率蛋白1(HMGB1)释放的抑制效应.方法 观察脂多糖刺激可增加HMGB1向胞外释放,在脂多糖刺激的不同时间点收集细胞及其培养上清,应用蛋白印迹法及酶联免疫法检测细胞内及培养上清中HMGB1蛋白水平的变化;另一方面,探讨脂多糖刺激对NFAT2与HMGB1在胞浆中的结合的影响,在脂多糖刺激的不同时间点收集THP-1细胞,提取蛋白后应用免疫共沉淀观察二者的结合情况;应用小RNA干扰技术抑制NFAT2的表达,检测对HMGB1合成释放的影响.结果 脂多糖刺激THP-1细胞时间越长,细胞培养上清的HMGB1浓度增加,而细胞浆内与NFAT2结合的HMGB1水平下降,细胞核内没有检测到二者的相互作用.NFAT2的小RNA干扰质粒转染后,THP-1细胞内NFAT2浓度下降,同时细胞上清中HMGB1的水平上升.结论 NFAT2可抑制HMGB1的合成释放.
