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免疫PCR技术检测梅毒螺旋体特异性蛋白的意义
目的 探讨免疫PCR技术检测梅毒螺旋体特异性蛋白TpN47的意义.方法 应用PCR法、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)法和酶素螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)法进行检测,比较三者的敏感性和特异性.分别用棉拭子取患者泌尿道处渗出液或血清为标本,所有操作严格按照试剂使用说明书进行,PCR方法用细菌基因组DNA提取试剂盒提取TP基因组DNA,设计TpN47基因的引物,取PCR扩增产物进行电泳检测,然后进行T-A克隆、亚克隆及测序,进行提纯、分析,TRUST法和TPPA法按常规进行.结果 单用三种检测方法,检出率无显著差异(P>0.05),三种方法的灵敏度、特异性不同,PCR法优于TRUST法和TPPA法(P<0.05).结论 免疫PCR技术检测TpN47抗原具有较高的敏感性和特异性,值得临床重视,对有效控制梅毒的蔓延和胎传梅毒的发生具有重要意义.
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免疫PCR检测HIV-1 p24抗原的初步评价
目的 对免疫PCR HIV-1 p24抗原检测体系的检出限、特异性和重复性等指标进行初步评价.方法 用建立的免疫PCR体系检测p24抗原,讨论检测方法的特异性、检出限和重复性指标,将空白对照的非特异性扩增条带用荧光密度值(FI)定量,初步提出特异性扩增下限的判定方法.结果 将非特异性扩增荧光密度值的(+3s)作为特异性扩增信号的判定下限,免疫PCR检测p24抗原的检出限为0.1 ng/L.结论 检测方法的检测限、特异性与重复性能满足HIV-1 p24抗原检测的需要.
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检测胃癌及癌前病变患者血清MG7Ag的临床意义
目的探讨肿瘤标志物单抗MG7相关抗原(MG7Ag)对胃癌和癌前病变的临床意义.方法应用免疫PCR技术对161例患者血清进行胃癌MG7Ag检测,其中胃癌68例,胃癌前病变30例,食道癌32例,慢性胃炎31例.结果胃癌组有56例阳性(82.35%),胃癌前病变组有9例阳性(30%),食道癌组有6例阳性(18.75%),慢性胃炎组有3例阳性 (9.68%).经统计学处理,胃癌组与其他组比较有非常显著性差异(P<0.01).胃癌前病变组与慢性胃炎组比较有显著性差异(P<0.05).28例胃癌患者术后血清MG7Ag阳性率比术前明显下降,且有统计学意义(P< 0.01).结论胃癌单克隆抗体相关抗原MG7对胃癌诊断有特异性,可作为胃癌早期诊断的有效指标,也可作为监测病情、判定疗效之用.
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夹心免疫PCR方法检测金葡菌肠毒素B
目的建立双抗夹心免疫PCR的检测技术,用于检测极微量的抗原.方法以亲和素作为连接分子,连接生物素化抗体和生物素化DNA,应用于免疫PCR中检测极微量金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB).结果双抗夹心免疫PCR的检测技术,检测SEB的灵敏度达0.1 ng/L,与夹心ELISA方法比较灵敏度高103倍.结论双抗夹心免疫PCR系统灵敏度高,可用于各种微量抗原的检测.
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免疫PCR法检测乳腺癌患者血清p185抗体的临床价值
目的 以免疫PCR法来检测乳腺癌患者血清中的p185抗体,并研究血清p185抗体在乳腺癌血清学诊断、预后判断以及疗效判断中的临床价值.方法 选取2008年至2010年期间就诊的经病理确认手术切除乳腺癌患者60例,所有乳腺癌患者均在术后7～10天左右接受常规方案化疗.收集患者术前、术后并三次化疗结束后血清,同时收集健康体检者血清60份.利用本实验室建立的免疫PCR法分别检测样本的血清p185抗体,并分析血清p185抗体与患者肿块大小、临床分期、淋巴结转移情况、绝经状态、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的关系.用卡方检验同时分析检测p185抗体对乳腺癌不同化疗方案的疗效评判及与复发转移的关系.结果 乳腺癌患者血清p185抗体阳性率为30％(18/60),明显高于非癌者(P＜0.01);乳腺癌患者血清p185抗体与肿瘤大小(x2=11.428,P＜0.05)、临床分期(x2=9.965 8,P＜0.05)关系密切,但与绝经状态、雌激素受体状态(ER)、孕激素受体状态(PR)、淋巴结转移情况等因素均无关系(P＞0.05).乳腺癌患者接受两种不同的化疗方案(CAF/CEF)治疗结束后血清p185抗体阳性表达二者之间无明显差异(x2 =0.051,P＞0.05).乳腺癌患者血清p185抗体阳性患者复发转移率高于p185抗体阴性患者,二者之间有明显差异(x2=2.147,P＜0.05).结论 免疫PCR法检测血清P185抗体可望为乳腺癌的早期诊断、复发转移的监测及预后判断提供了一种简单易行的方法.
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肠出血型大肠埃希菌免疫PCR检测方法的建立
目的 建立检测肠出血型大肠埃希茼O157∶H7的免疫PCR技术,确定该方法 的灵敏度和特异性.方法 链亲和素桥联生物素化的二抗和双链DNA指示分子,构建桥联系统,进而建立免疫PCR技术,通过PCR扩增指示分子检测O157∶H7.结果 免疫-PCR技术少可检测到10 CFU/ml的纯培养菌,灵敏度较ELISA提高103倍,非O157∶H7菌株检测结果 均为阴性.结论 免疫-PCR技术具有较高的灵敏度和特异性,操作简便、快速,可作为肠出血型大肠埃希菌O157∶H7的检测方法.
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囊型包虫病实验诊断的研究现状
人体囊型包虫病的病原学诊断比较困难,多种检测方法都有助于包虫病的诊断,但至今缺乏公认的金标准,常需要综合诊断.影像学检查尤其是超声波检查是临床诊断、分期和随访的基石;免疫学实验尤为重要,有助于明确诊断,主要以天然抗原及重组抗原为基础的免疫学诊断常用.此外,分子生物学技术也已经用于细粒棘球蚴病的诊断和虫种的鉴定.本文就囊型包虫病的各种实验诊断技术及其研究现状做一综述.
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乳腺癌P53蛋白表达及其血清抗体检测分析
目的探讨乳腺癌患者P53蛋白及抗体表达情况. 方法采用免疫PCR方法检测血清抗P53蛋白抗体,酶免疫组化方法检测组织P53蛋白表达. 结果乳腺癌患者血清抗P53蛋白抗体阳性率为39.5%,而非癌患者和正常人血清抗P53蛋白抗体均为阴性(P《0.01).P53蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗P53蛋白抗体阳性率为64.2%,明显高于P53蛋白阴性表达组,血清P53抗体测定与P53蛋白表达密切相关(P《0.01). 结论检测血清抗P53蛋白抗体是检测组织P53蛋白理想的替代工具,可作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.
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免疫PCR的研究进展
免疫PCR是90年代发展起来的一种高灵敏度检测技术,本文就其应用、种类以及它的连接分子、报告分子、载体、显示系统、假阳性控制和优化策略等方面的问题作简要论述。
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夹心免疫PCR方法检测蓖麻毒素
目的建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术,检测极微量的抗原.方法以亲和素作为连接分子连接生物素化抗体和生物素化DNA,应用于免疫PCR中,检测极微量的抗原.结果建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术,检测蓖麻毒素的灵敏度达0.1 pg/mL,与夹心ELISA方法比较灵敏度高103倍.结论建立的免疫PCR系统灵敏度高,可用于各种微量抗原的检测.
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双抗夹心免疫PCR法检测人促甲状腺激素(TSH)
目的建立人促甲状腺激素(TSH)的免疫PCR方法.找到一种高特异性高灵敏度的简便快速的方法检测低浓度抗原分子.方法用单克隆抗体包被Eppendorf管,生物素化多抗和游离的亲和素作为连接分子,生物素化重组质粒作为指示分子,用特异引物扩增指示分子,同时与放射免疫技术、免疫放射技术和ELISA方法作比较.结果这种改进的免疫PCR技术可检测到1×10-18mol/LTSH含量比常规与法检测下限增高了105倍.结论这种方法的应用也为临床大量样品的检测提供了可能.
关键词： 双抗夹心 免疫PCR 人促甲状腺激素(TSH) -
免疫PCR检测HIV-p24抗原的实验研究
目的 建立检测HIV-p24抗原的高灵敏度免疫PCR方法.方法 以金磁微粒为免疫PCR载体、鼠抗HIV-p24单抗为捕获抗体、生物素化的羊抗p24多克隆抗体为检测抗体,通过链亲和素的桥联标记生物素化的多抗,被双抗体夹心捕获的人重组HIV-p24抗原通过PCR扩增报告DNA的方式予以检测;用方阵滴定法确定适链亲和素和标记DNA浓度,用Quantity One凝胶定量软件分析电泳图像.结果 链亲和素浓度和用于标记的DNA的浓度分别控制在0.1 ms/L和10 ng/L;免疫PCR检测的灵敏度为0.1 ng/L,比传统ELISA法检测的灵敏度高.结论 高灵敏度的免疫PCR适用于早期筛检HIV-p24抗原.
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免疫PCR检测乳腺癌患者血清p185蛋白抗体
目的 为乳腺癌诊断提供血清学新标志.方法 免疫PCR方法检测血清抗p185蛋白抗体,酶免疫组化方法检测组织p185蛋白表达.结果 乳腺癌患者血清抗p185蛋白抗体阳性率为30%,而非癌患者和正常人血清抗p185蛋白抗体均为阴性,乳腺癌患者血清中抗p185蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人(P<0.01).p185蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p185蛋白抗体阳性率为69.2%,明显高于p185蛋白阴性表达组,血清p185抗体测定与p185蛋白表达密切相关(P<0.01).结论 检测血清抗p185蛋白抗体是检测组织p185蛋白理想的替代工具.抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.
