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实验性急性心肌梗死心肌细胞凋亡与p53和Bcl－2基因mRNA表达的研究
目的 探讨p53和Bcl－2基因在实验性急性心肌梗死(AMI）心肌细胞凋亡中的作用。方法 用TUNEL法检测48只兔AMI模型梗死区的心肌细胞凋亡，用以cDNA为内参标的逆转录-聚合酶链反应(RT－PCR)的方法检测其心肌细胞内p53和Bcl－2基因mRNA表达量，并探讨它们之间的相互关系。结果 TUNEL法发现兔梗死区心肌细胞凋亡千分率在冠脉结扎前(0h)和结扎后1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h的改变如下：0h组和12h组＜1h组＜2h组和8h组＜3h组＜4h组(P均＜0.05)；p53基因mRNA表达量依次为：冠脉结扎后4h组＞结扎后6h组＞结扎后3h组＞结扎后2h组＞未结扎(0h)组和结扎后1h组、8h组、12h组(P均＜0.05)；且梗死区心肌细胞凋亡数与其内p53 mRNA表达量对数值之间成明显的正相关性(r为0.9300，P＜0.001)。Bcl－2基因mRNA表达量：冠脉结扎后3h组、4h组和6h组＜结扎后2h组、8h组＜结扎后1h组和未结扎(0h)组＜结扎后12h组(P均＜0.05)；且梗死区心肌细胞凋亡数分别与其内Bcl－2 mRNA表达量的对数值成明显的负相关性(r为－0.8732，P＜0.001)；p53和Bcl－2基因mRNA表达量的对数值之间亦呈明显的负相关性(r＝－0.9649，P＜0.001)。结论 急性心肌梗死时心肌细胞存在明显的凋亡特征，尤其缺血后3～6h内更为明显，8h以后则凋亡减少，同时受p53基因上调、Bcl－2基因下调其凋亡。
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基于益肾填精法的茸菖胶囊对无镁诱导癫痫模型自噬相关蛋白影响的研究
[目的]探讨中药茸菖胶囊抗癫痫和神经保护作用的自噬调控机制,为临床应用提供实验依据.[方法]将无镁诱导的新生SD大鼠海马神经元放电模型分为模型组、3－甲基腺嘌呤(3－MA)组、5%茸菖胶囊组、10%茸菖胶囊组、20%茸菖胶囊组,另设正常组,给予相应处理6、12、24、72 h后,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬活性相关蛋白Beclin－1、B细胞淋巴瘤－2(Bcl－2)的表达.[结果] 1)Beclin－1蛋白:4个时间点模型组较正常组无显著变化(P＞0.05),6 h 20%茸菖胶囊组及72 h 5%茸菖胶囊组较同时点模型组显著升高(P＜0.05).2)Bcl－2蛋白:6 h模型组较正常组显著降低(P＜0.05);12、24 h 20%茸菖胶囊组,72 h 5%、10%及20%茸菖胶囊组较模型组显著增强(P＜0.05或P＜0.01),20%茸菖胶囊组较5%及10%茸菖胶囊组增强(P＜0.05).[结论]基于益肾填精法的茸菖胶囊对无镁诱导的癫痫模型神经元抗癫痫及神经元保护作用的机制可能与影响Beclin－1蛋白的表达干预自噬过程,促进Bcl－2蛋白的表达抑制细胞自噬有关.
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基底细胞癌 Bcl－ 2、 Bax、 Bcl－ xl 蛋白免疫组化表达的定量研究
目的通过对基底细胞癌 Bcl－ 2、 Bax、 Bcl－ xl蛋白表达的研究，探讨 3种蛋白在基底细胞癌发生、发展中的作用。方法按病理亚型将 46例基底细胞癌分为非侵袭组（ 21例）和侵袭组（ 25例），采用免疫组化 SP法检测 Bcl－ 2、 Bax、 Bcl－ xl蛋白在石蜡切片上的表达，并对组化结果进行图像分析以获得平均光密度和 Bcl－ 2/Bax 的比值。结果非侵袭性基底细胞癌组 Bcl－ 2蛋白表达水平和 Bcl－ 2/Bax的比值高于侵袭性基底细胞癌组， P值分别为 0.005和 0.044; 两组间 Bcl－ xl、 Bax蛋白表达水平的差异无显著性， P值分别为 0.097和 0.979。结论 Bcl－ 2 、 Bcl－ xl、 Bax蛋白可能参与了基底细胞癌的发生、发展。
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ApoG2对非小细胞肺癌吉非替尼耐药的逆转作用
目的 以人非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼耐药细胞系PC9/GR为实验对象,研究左旋棉酚的新型衍生物ApoG2对PC9/GR细胞的耐药逆转作用,诱导PC9/GR细胞凋亡以及初步探讨其可能的作用机制.方法 不同浓度的吉非替尼(2.5、5、7.5、10、12.5、15、20 mmol/L)、ApoG2(10、20、40、60、80 μmol/L)单药以及两药联合作用于PC9/GR细胞48 h,采用CCK8法检测细胞增殖抑制率,计算耐药倍数以及逆转耐药倍数.将PC9/GR细胞分为4组,分别是对照组、吉非替尼组、ApoG2组以及联合组,克隆形成实验检测药物对PC9/GR细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测各组凋亡率的改变;Western Blot检测各组凋亡相关蛋白的表达情况.结果 CCK8结果显示,吉非替尼与ApoG2单药对PC9/GR细胞的体外增殖抑制作用随浓度的提高而增加,呈剂量依赖性;联合用药可以更好地抑制PC9/GR细胞增殖,选择10 μmol/L的ApoG2联合吉非替尼,耐药逆转倍数为3.19;与对照组及吉非替尼组、ApoG2组相比,联合组细胞克隆形成率明显降低(P＜0.01),细胞凋亡率明显提高(P＜0.01);Western Blot显示联合组Bcl－2蛋白表达显著下调(P＜0.05), Bax蛋白、Caspase－3蛋白表达显著上调(P＜0.05).结论 低剂量的 ApoG2可以逆转 NSCLC 吉非替尼耐药,ApoG2联合吉非替尼可以更好地抑制PC9/GR细胞增殖和克隆形成,诱导耐药细胞发生凋亡.
关键词： NSCLC 增殖 凋亡 EGFR－TKI耐药 Bcl－2
