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人单链抗体亲和力成熟研究
目的探索基因工程抗体亲和力体外成熟新技术，获得抗血管内皮生长因子高亲和力的抗体，使之成为肿瘤血管靶向治疗的载体。方法采用错配PCR和单链重叠延伸法，随机突变抗体重链可变区，建立次级噬菌体单链抗体突变库，并从中筛选出高亲和力单链抗体突变株。结果抗体突变株不仅保留了母体抗体的特异性，而且亲和力明显提高。根据基因序列分析，高亲和力突变株中有4个氨基酸发生了改变，分别是Trp38→Cys38，Gln45→Arg45，Lys107→Arg107，Arg109→Leu109。抗体立体结构模拟显示其中3个氨基酸突变位于抗原结合部位。结论实验结果为抗血管内皮生长因子人源单链抗体的应用奠定了基础，同时为抗体结构与功能研究以及抗体亲和力体外成熟提供了参考模型。
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从半合成噬菌体抗体库中克隆抗地高辛人单链抗体1
目的:从半合成噬菌体抗体库中克隆抗地高辛(Dig)人单链抗体(ADA ScFv),为Dig中毒的诊断和治疗提供人源性抗体.方法:1以改良法制备Dig-BSA偶联物;2以固相化的Dig-BSA偶联物对人噬菌体ScFv抗体库进行了4轮筛选,通过ELISA筛选出能结合Dig的抗体克隆并鉴定其活性,通过ELISA竞争抑制实验分析其特异性,对阳性克隆的DNA进行测序分析.结果:1在对抗体库的筛选过程中可见有明显的富集;2获得一株可结合Dig及其类似物的阳性克隆;3阳性克隆的可变区分别属于VH5和Vλ1亚群.结论:利用噬菌体抗体库技术获得了能与Dig及其它洋地黄类药物结合的人ADA ScFv,经进一步分析及抗体工程改造后,有可能为临床上诊断及治疗洋地黄类药物中毒提供具有实用价值的人源性抗体.
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从半合成噬菌体抗体库筛选抗狂犬病毒人单链抗体
目的应用纯化的狂犬病毒抗原从半合成噬菌体抗体库中筛选针对狂犬病毒的人单链抗体(ScFv).方法用固相化的狂犬病毒抗原对半合成抗体库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,从第3轮洗脱下来的克隆中获得一株有可溶性表达且特异性结合狂犬病毒抗原的ScFv,并进行基因序列测定.结果所获氨基酸序列经blast数据库搜索,与一种抗狂犬病毒免疫球蛋白的氨基酸序列同源性高(82%).经检索kabat数据库,发现其轻、重链可变区分别属于VkⅠ型、VHⅢ型.结论从噬菌体抗体库可以方便快捷地分离到针对狂犬病毒的单链抗体,对狂犬病毒的预防具有重要意义.
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从半合成抗体库克隆抗TNF-α人单链抗体
通过噬菌体抗体库技术,不经免疫克隆抗TNF-α人单链抗体,用固相化的人重组TNF-α抗原对半合成噬菌体抗体库进行了4轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,可见到明显富集,从第3轮和第4轮洗脱下来的克隆中获得两株可特异结合TNF-α的克隆,其可变区分别属于VH1、VH3和Vλ1亚群.
