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金黄色葡萄球菌外毒素A文献资料
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抗HIV-1 gp41单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控表达及活性检测
目的获得抗HIV-1 gp41单链抗体与葡萄球菌外毒素A融合表达的重组导向毒素蛋白.方法人工合成能广泛识别HIV-1 gp41的单链抗体(ScFv41)基因和金黄色葡萄球菌外毒素A(SEA)基因,将SEA基因第 227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT,并对两基因进行密码子优化.以大肠杆菌温控型表达质粒pBV220为载体,分别构建单表达ScFv41的质粒pBV-41和SEA与ScFv41融合表达的质粒pBV-SL41,转化大肠杆菌感受态细胞,通过提高温度诱导表达,表达产物经分子筛层析折叠复性后,检测单链抗体结合活性及重组导向毒素介导的细胞毒淋巴细胞(CTL)杀伤活性.结果表达质粒pBV-41和pBV-SL41分别在E.coli BL21(DE3)plys中44℃诱导6 h、42℃诱导7 h得到较高表达,经SDS-PAGE、薄层扫描分析表明,目的蛋白分别占菌体总蛋白的14.359%和23.482%,目的蛋白经复性后可与HIV-1抗原条发生良好的结合反应,并且SL41可激活外周血淋巴细胞(PBMC)并介导其杀伤稳定表达HIV-1 gp160蛋白的靶细胞.结论成功得到ScFv41与SEA融合表达蛋白SL41,为研制抗HIV-1重组导向毒素奠定基础.
关键词： HIV gp41 单链抗体 金黄色葡萄球菌外毒素A 表达
