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交联抗人DR5单抗诱导的Jurkat细胞凋亡的信号转导
目的 探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗--YM366EC对Jurkat细胞增殖的影响,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制.方法 MIT方法检测抗体对Jurkat细胞存活率,FITC-Annexin V/PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响.交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12 h收集细胞,提取蛋白Western blot检测Bcl-2、Cyt-C、Caspase-8、Caspase-3、Bax、Caspase-9的变化.结果 抗DR5抗体单独应用不能抑制高表达DR5分子的Jurkat细胞增殖,但应用抗小鼠IgG交联DR5抗体后可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变.并且Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax,有活性的Caspase-8、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达增加.结论 交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase-8、Caspase-3、Caspase-9.
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交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究
目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据.方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-Annexin V及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响.进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化.结果:DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变.Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl- 2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加.结论:交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9.
