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人乳头状瘤假病毒中和抗体滴度和ELISA法测定的小鼠血清抗体滴度的相关性研究
目的 探讨两种不同的报告基因纽扣珊瑚绿色荧光蛋白(Zoanthus sp.green fluorescent protein,ZsGreen)和分泌性碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)测量的人乳头状瘤假病毒中和滴度之间的相关性,以及中和滴度和抗体滴度的相关性.方法 将密码子优化的人乳头状瘤病毒(HPV)衣壳蛋白L1、L2基因表达质粒和报告基因质粒共转染293FT细胞,48 h后收集细胞裂解上清,柱层析纯化假病毒,对假病毒滴度进行测定.采集免疫过候选HPV疫苗和Gardasil疫苗的小鼠血清,测量血清的中和滴度和抗体滴度.结果 经统计分析,这两种报告基因系统的假病毒检测的中和滴度结果高度相关(Spearman相关系数r=0.760),而且中和滴度和抗体滴度的相关度很高(Spearman相关系数r=0.577和0.741).结论 两种不同的报告基因ZsGreen和SEAP测量的HPV假病毒中和滴度之间,以及中和滴度和ELISA测定的抗体滴度之间高度相关,揭示了部分HPV疫苗预防病毒入侵的机制,为快速准确鉴定HPV-16和HPV-18候选疫苗的免疫保护效果奠定了基础.
关键词： 假病毒 纽扣珊瑚绿色荧光蛋白 分泌性碱性磷酸酶 中和抗体滴度 -
丙型肝炎病毒5′端非编码区和NS3蛋白酶共调控外分泌性碱性磷酸酶表达细胞模型的建立及意义
目的构建丙型肝炎病毒5′端非编码区(HCV 5′NCR)和NS3丝氨酸蛋白酶共调控外分泌性碱性磷酸酶(SEAP)表达细胞模型,并分析其用于抗HCV药物筛选和评价的可行性.方法用聚合酶链反应技术扩增HCV 5′NCR和NS3/4A片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,构建含HCV 5′NCR-NS3/4A-SEAP嵌合基因的重组表达质粒pNCR-NS3/4A-SEAP.将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701,用化学发光法检测SEAP的表达,并观察HCV 5′NCR区对应的反义寡聚核苷酸(ASODN)和丝氨酸蛋白酶抑制剂TPCK对SEAP表达的影响.结果重组质粒pNCR-NS3/4A-SEAP有高强度SEAP表达,5 μmol/L、10 μmol/L ASODN和100μmol/L TPCK对SEAP表达有显著抑制作用(f值分别为4.315、6.985、6.949,P值均＜0.01).结论重组质粒pNCR-NS3/4A-SEAP的SEAP表达受HCV 5′NCR和NS 3蛋白酶共调控,建立的细胞模型可用于以H CV 5′NCR和NS 3蛋白酶为靶位点的药物筛选和评价.
