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乳头瘤病毒重组减毒沙门菌疫苗的构建及诱导黏膜免疫的研究
乳头瘤病毒在生殖道黏膜增殖传播,与妇女生殖道黏膜检测不到HPV IgA抗体有关,因此诱导生殖道黏膜HPV特异性抗体对于防治HPV性传播性疾病具有重要的价值.
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人乳头瘤病毒HPV6b重组减毒沙门菌粘膜免疫的效果测定
为观察人乳头瘤病毒6b型(HPV6b)的重组减毒沙门菌载体疫苗粘膜免疫小鼠的免疫效果及探讨研制治疗尖锐湿疣的治疗性粘膜疫苗的机制,我们用构建的HPV6b重组减毒沙门菌粘膜免疫BALB/c小鼠,检测了阴道冲洗液中特异的SIgA、血清中IgG、T淋巴细胞增殖以及载体疫苗在机体内的稳定性.结果表明,粘膜免疫后,实验组与对照组相比较,阴道冲洗液中抗HPV6b L1的SIgA差异显著,实验组血清中抗HPV6b L1 IgG水平低,T淋巴细胞增殖明显,疫苗在小鼠体内持续存在40d以上.研究结果提示我们所构建的重组减毒沙门菌粘膜免疫小鼠后,阴道粘膜局部能分泌特异的抗人乳头瘤病毒HPV6b SIgA,也能激发细胞免疫,且此疫苗在小鼠体内能稳定存在.
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9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达
目的 构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础.方法 以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌;重组质粒电转化减毒沙门菌后,将重组菌感染巨噬细胞,以RT-PCR检查颗粒溶素的表达.结果 成功扩增出含分泌肽编码基因的9 ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9 ku颗粒溶素;重组减毒沙门菌感染细胞后,检测到颗粒溶素的表达.结论 成功构建含9 ku颗粒溶素活性肽基因的重组减毒沙门菌,该菌能成功递呈携带基因在感染细胞内表达.
