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体外阻断CD134对LN患者外周血单个核细胞TH1/TH2细胞因子表达的影响
目的探讨CD134/CD134L共刺激分子对TH1/TH2细胞因子表达的影响及在狼疮性肾炎(LN)发病机制中的可能作用.方法活动期LN患者10例,分别采取外周静脉血,用密度梯度离心法制备新鲜PBMC,分成6组:(1)对照培养组;(2)单纯刺激组;(3)抗CD134组;(4)抗IL-4组;(5)rhCD134∶Fc组;(6)地塞米松(Dex)组.另选取10例健康体检者作为健康对照组.采用ELISA法分别测定培养液上清中IFN-γ、IL-4、IL-10表达水平.结果 (1)在抗CD3ε单抗/rIL-2刺激前,活动期LN患者PBMC培养液上清分泌的IFN-γ、IL-4和IL-10水平都明显高于健康对照组;(2)在抗CD3ε单抗/rIL-2刺激下,活动期LN患者PBMC分泌的IFN-γ、IL-4和IL-10又较刺激前明显增加;(3)抗IL-4单抗、抗CD134单抗均可使经抗CD3ε单抗/rIL-2刺激的LN患者PBMC分泌IL-4、IL-10水平显著下降,导致IFN-γ水平显著增高,免疫应答朝TH1方向偏离;(4)Dex能显著抑制抗CD3ε单抗/rIL-2刺激的原代培养PBMC中IL-4、IFN-γ的分泌水平,但对IL-10的产生并没有明显的抑制或促进作用;(5)rhCD134∶Fc能显著降低抗CD3ε单抗/rIL-2刺激的原代培养PBMC中IFN-γ及IL-4、IL-10的分泌水平,对TH1和TH2细胞因子的产生都有显著抑制作用.结论糖皮质激素的抗炎机制具有多重性,对TH1、TH2细胞因子的作用并不均衡;抗CD134单抗对减轻LN患者PBMC的异常活化有一定作用;CD134-IgG融合蛋白与抗CD134单抗相比,抑制作用更明显,对急性期LN有更好的治疗作用.
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中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠脾细胞CD134/CD134L表达的影响
目的:探讨CD134/CD134L共刺激信号在SLE发病机制中的可能作用及狼疮方对其表达的影响.方法:采用狼疮样BXSB小鼠模型,随机分为3组:狼疮方治疗组、泼尼松治疗组、空白模型组,每组6只,疗程10周.另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组.分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测.结果:(1)与正常对照组比较,模型组BXSB小鼠的血清IgG和抗ds-DNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著增高(P＜0.05或P＜0.01).(2)狼疮方治疗组或泼尼松治疗组的血清IgG、抗ds-DNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著低于模型组(P＜0.05或P＜0.01),而与正常对照组比较无统计学差异(P均＞0.05).结论:狼疮样BXSB小鼠存在CD134/CD134L的异常表达.狼疮方可减轻狼疮样小鼠高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生,对CD134/CD134L存在泼尼松相当的下调作用,抑制T、B细胞的异常活化,有效地治疗SLE.
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体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响
目的:探讨体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响.方法:采用未经治疗的狼疮样BXSB小鼠模型,应用CD134L单抗和/或CTLA4Ig体外特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28通路后,用MTT法测定分裂原刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞增殖反应和用ELISA方法测定ConA诱导的脾细胞培养上清液中IL-6、IFN-γ和抗ds-DNA抗体的表达水平,并与经中药狼疮方或强的松治疗的狼疮样BXSB小鼠模型进行比较.结果:(1)在单纯培养或经ConA刺激后培养,相比于正常对照鼠,狼疮样小鼠脾淋巴细胞都表现有增殖反应性的显著增高,IFN-γ、IL-6蛋白量的增高和抗ds-DNA抗体的过度分泌.(2)经强的松或中药狼疮方体内治疗后,狼疮样小鼠脾淋巴细胞体外培养的增殖反应性及IFN-γ、IL-6的分泌都受到明显抑制,抗ds-DNA抗体的产生也明显减少.(3)体外单独应用CD134L单抗或CTLA4Ig特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28共刺激信号通路,同样可以显著抑制体外培养的狼疮样小鼠脾淋巴细胞的增殖反应及IFN-γ、IL-6的分泌,并可明显减少抗ds-DNA抗体的产生,但它们的抑制作用比强的松、中药狼疮方体内治疗狼疮样小鼠时所表现出的类似效应要弱.(4)联合CD134L单抗和CTLA4Ig,则治疗作用显著提高,其抑制脾淋巴细胞的增殖反应及IFN-γ、IL-6的分泌,抗ds-DNA抗体产生的作用都优于中药狼疮方的体内治疗效果,而与强的松的体内治疗效应相当.结论:CD134-CD134L可以提供独立的、非B7-CD28依赖的,另一种驱动抗原特异性T细胞增殖的协同刺激通路.同时阻断B7与CD28、CD134L与CD134间的相互作用,使自身反应性T淋巴细胞的活化和增殖受到快速而大限度的抑制,对治疗SLE等自身免疫性疾病可能是一种较理想的免疫干预模式.
