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大肠杆菌qseC基因敲除及其缺陷株生物被膜形成的研究
目的 通过Red同源重组法构建qseC基因缺失的大肠杆菌突变株,并探讨qseC基因对大肠杆菌生物被膜形成的影响.方法 PCR扩增两翼与目的基因上下游同源、含有氯霉素抗性基因片段,电击转化人大肠杆菌MC1000,在Red同源重组酶作用下,用含同源臂的氯霉素抗性片段置换目的基因qseC,并利用FLP位点专一性重组将氯霉素抗性基因删除.结晶紫染色半定量法分析qseC基因缺失株生物被膜形成能力的变化.结果 PCR及DNA测序结果表明,qseC基因已被成功敲除.在LB培养基中,qseC基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异.MC1000与MC1000 △qseC基因缺失株生物被膜形成能力半定量A值的结果分别为1.00±0.15和0.47±0.10.结论 成功构建大肠杆菌qseC基因缺失突变株,且qseC基因对细菌生物被膜的形成具有调控作用.
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鸡致病性大肠杆菌qseC基因缺失突变株的构建及其生物学特性
目的 构建鸡致病性大肠杆菌qseC基因缺失突变株和鸡致病性大肠杆菌qseC基因缺失互补株,并探讨qseC基因缺失对鸡致病性大肠杆菌生物学特性的影响.方法 构建qseC基因缺失突变株和qseC基因缺失互补株并验证;绘制鸡致病性大肠杆菌野生株、qseC基因缺失突变株和qseC基因缺失互补株的生长曲线,并进行体外竞争试验、血凝试验和荧光定量PCR分析.结果 qseC基因缺失突变株和qseC基因缺失互补株构建正确.生长曲线显示,qseC基因缺失突变株相对于野生株的生长速度降低,qseC基因缺失互补株的生长速度显著提高,但并没有完全达到野生株的水平.野生株和qseC基因缺失突变株体外竞争试验竞争参数值为0.67,野生株和qseC基因缺失互补株体外竞争试验竞争参数为1.14.相对于野生株,qseC基因缺失突变株的血凝滴度下降50％,Ⅰ型菌毛相关基因表达下调;qseC基因缺失互补株的血凝滴度达到野生株水平,且部分Ⅰ型菌毛相关基因表达上升.结论 鸡致病性大肠杆菌qseC基因缺失降低了鸡致病性大肠杆菌的生长速度、生长能力以及对豚鼠红细胞的粘附能力.
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大肠杆菌qseC基因敲除及其缺陷株运动能力研究
目的 通过Red同源重组法构建qseC基因缺失的大肠杆菌突变株,探讨qseC基因对大肠杆菌运动能力的影响.方法 PCR扩增两翼与目的基因上下游同源、含有氯霉素抗性基因片段,电击转化入大肠杆菌MC1000,在Red同源重组酶作用下,用含同源臂的氯霉素抗性片段置换目的基因qseC,并利用FLP位点专一性重组将氯霉素抗性基因删除.测定qseC基因缺失株运动能力的变化.结果 qseC基因已被成功敲除.在LB培养基中,qseC基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异.MC1000与MC 1000qseC基因缺失株运动圆环的直径分别为(6.10±0.36) mrm和(3.20±0.53) mm (P＜0.01).结论 成功构建大肠杆菌qseC基因缺失突变株,且qseC基因对细菌运动能力具有重要调控作用.
