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结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株亚细胞蛋白质组差异研究
目的 研究结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株亚细胞蛋白质组差异，鉴定菌体细胞壁蛋白和细胞膜蛋白中与异烟肼耐药相关的蛋白，并初步探讨其在临床检验中的应用价值。方法 应用密度梯度离心法分离5株异烟肼耐药株和5株敏感株的细胞壁和细胞膜蛋白，利用二维液相色谱分离技术进一步获得耐药株和敏感株的亚细胞蛋白表达差异图谱。运用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱技术对获得的1280个细胞壁和细胞膜组分进行质谱鉴定，并运用DAVID数据库中GO注释功能对鉴定到的蛋白进行细胞成分和生物过程的注释和分类。运用NASF技术对蛋白表达进行定量，报告阈值为1.5。选取5个在耐药株中表达上调、2个在敏感株中表达上调的蛋白分别与菌株来源患者的血清进行ELISA检测，检测上述组分与血清样品发生免疫应答的强度，组间比较采用t检验。结果 共鉴定到347个蛋白。蛋白定位分析表明58％蛋白定位于细胞膜或跨膜。蛋白功能聚类分析表明31％蛋白参与三羧酸循环，26％、15％蛋白分别参与脂类、脂肪酸生物合成和代谢，28％蛋白参与脂质体的生物合成、代谢、转运和定位。其中琥珀酰氯化胆碱合酶、单加氧酶、假想蛋白Rv2255c、烟碱核苷二甲基联苯酰磷酸核酮糖激酶、膜磷脂胞嘧啶转移酶在耐药株中表达上调，含有上述蛋白的组分与感染耐药株患者的血清免疫学反应的吸光度（A450值）明显高于与感染敏感株患者的血清免疫学反应强度，差异有统计学意义(t值分别为0.028、0.044、0.066、0.064、0.083，P均＜0.01)。Rv2002蛋白A链、Rv2632c蛋白A链在敏感株中表达上调，含有上述蛋白的组分与感染敏感株患者的血清免疫学反应的A450值明显高于与感染耐药株患者的血清免疫学反应强度，差异有统计学意义（t值分别为0.053、0.073，P均＜0.05）。结论 运用密度梯度离心法和二维液相色谱-质谱技术能在亚细胞水平上富集并鉴定结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株中表达有差异的蛋白。有助于寻找异烟肼耐药株感染相关的抗原蛋白，为进一步探讨结核分枝杆菌耐异烟肼机制、研究耐药株-宿主相互作用提供了有价值的线索。
关键词： 结核分枝杆菌 异烟肼耐药 二维液相色谱-质谱技术 亚细胞蛋白质组 -
叶绿体的蛋白质组学研究进展
蛋白质组学是以基因组编码的所有蛋白为研究对象,高通量地从细胞及整体水平上研究蛋白质的组成及其功能的新兴学科.在后基因组时代的今天,蛋白质组学的研究正逐渐深入到生命科学的各个领域,21世纪蛋白质组学将成为生命科学中热门的学科.蛋白质组分析已成为鉴定植物功能的有力工具之一,叶绿体作为比较重要的细胞器,在植物蛋白质组学中已有较多的研究.随着双向电泳技术的改进和质谱法的出现,并与不断增多的拟南芥、水稻、玉米等植物的序列数据相结合,叶绿体蛋白质组可以被快速鉴定.本文主要介绍了植物蛋白质组学、叶绿体及其蛋白质组学研究技术和研究进展,并对蛋白质组学的研究趋势进行了展望.
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人肝癌细胞株QGY-7701亚细胞蛋白质组双向电泳技术的建立
目的 优化人肝癌细胞株QGY-7701的蛋白质样品制备方法 ,建立其亚细胞蛋白质组双向电泳技术.方法 分步提取人肝癌细胞株QGY-7701细胞质、细胞膜和细胞核蛋白,采用不同的方法 除盐、浓缩样品,然后分别采用2种不同的水化上样缓冲液重悬样品,进行双向凝胶电泳.结果使用三氯乙酸/丙酮的除盐效果好,样品损失少;采用上样缓冲液(7 mol/L尿素+2 mol/L硫脲+4%CHAPS+40 mmol/L Tris+65 mmol/L DTT+2%两性电解质)有利于蛋白的溶解,获得更多的蛋白信息,检出的细胞质蛋白点数可达(995±53),细胞膜蛋白点数可达(1 035±58),细胞核蛋白点数可达(893±45).结论 获得了清晰的人肝癌细胞株QGY-7701亚细胞蛋白质组双向电泳图谱.
关键词： 人肝癌细胞株QGY-7701 亚细胞蛋白质组 双向电泳
