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实验性脑脓肿组织中G蛋白信号系统相关基因的克隆
目的筛选和克隆实验性脑脓肿的早期相关基因,研究脑组织对病原菌的免疫反应过程中所涉及的分子机制. 方法通过脑组织内直接注射金黄色葡萄球菌获得大鼠脑脓肿,利用mRNA荧光差异显示PCR技术比较脑脓肿组脑组织中mRNA的表达与正常对照组、手术对照组之间的差异,获得的差异表达cDNA片段经克隆、测序及BLAST软件进行同源性比较分析,并采用Northern杂交和RT-PCR进行鉴定. 结果共获得25条差异表达的cDNA条带,经Northern杂交和RT-PCR鉴定其中17条为阳性(阳性率为68%).克隆和测序结果显示其中3个差异表达片段与G蛋白相关的细胞信号传导系统有关:片段G18-1代表的鸟苷二磷酸解离抑制因子3(GDI3)、片段G20-1代表的交集素(ITSN)以及片段C2-1代表的Ras相关蛋白(Rap1). 结论在实验性脑脓肿早期GDI3、ITSN和Rap1差异表达,推导G蛋白信号系统的激活可能与脑脓肿的发病相关.
关键词： 实验性脑脓肿 mRNA差异显示PCR G蛋白 金黄色葡萄球菌 -
脑脓肿相关新基因RBAG2-3的电子克隆及其功能预测
目的研究脑脓肿形成和发展过程中所涉及的新分子.方法对应用mRNA荧光差异显示技术(DD-PCR)获得的脑脓肿早期差异表达cDNA片段G2-3进行电子克隆,根据电子克隆的结果设计引物进行逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)、克隆及测序,验证电子克隆的准确性,并利用生物信息学技术对电子克隆产物进行功能预测.结果G2-3经电子克隆获得长度为1 157 bp的新基因RBAG2-3,Genbank登陆号为CN382815.结构功能分析显示RBAG2-3编码73个氨基酸残基的蛋白,存在多个功能作用位点,并具有PSI和H-NS结构功能域.结论经电子克隆获得新基因RBAG2-3,其编码蛋白具有多个功能作用位点,并具有能对神经上皮组织基因表达起作用的结构功能域,可能在脑脓肿的发病中起重要作用.
