首页 > 文献资料
-
集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用
目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白(agrin)是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成. 方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达,并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系;用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响;应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成. 结果 RT-PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达,且经过实时定量PCR分析发现,集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关;当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制;经共聚焦显微镜观察发现,集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在,且和CD3分子共定位,抗集聚蛋白抗体可以明显减少这种帽化结构的形成. 结论在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞,可能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化.
-
集聚蛋白在免疫细胞中的表达及其意义
为研究在神经突触中发挥重要作用的突触调节蛋白集聚蛋白是否在免疫细胞中表达并影响淋巴细胞的活化.首先通过RT-PCR、荧光免疫组织化学和FACS分别从mRNA水平和蛋白水平观察集聚蛋白在各种免疫器官、细胞中的表达;通过实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达与淋巴细胞活化的关系;并构建针对集聚蛋白的反义质粒,从而进一步研究下调集聚蛋白的表达对淋巴细胞活化的影响.结果发现集聚蛋白广泛表达于脾脏、胸腺、淋巴结等多种免疫器官中并在T细胞、B细胞、imDC、mDC及巨噬细胞中均有表达,其表达含量与淋巴细胞的活化状态密切相关,且其表达被下调后淋巴细胞的活化显著被抑制.因而组成性表达于各种免疫细胞中的集聚蛋白可被诱导性上调,并参与了淋巴细胞的活化.
-
CVB3感染对星形胶质细胞表达agrin的影响及意义
目的 检测柯萨奇B3病毒(coxsackievirus group B type 3,CVB3)感染体外培养的星形胶质细胞后集聚蛋白(agrin)的表达变化及其意义.方法 采用免疫细胞化学的方法鉴定培养的星形胶质细胞,在显微镜下观察CVB3感染后的细胞形态,并用RT-PCR方法扩增CVB3 RNA的正负链以确证感染成功.用RT-PCR检测CVB3感染细胞后agrin的动态表达变化.用脂质体将agrin反义质粒pcDNA3-As-AG转染到星形胶质细胞,并用RT-PCR检测转染的细胞中agrin的表达.3H-TdR掺入法测定CVB3不同感染时间点的星形胶质细胞裂解液和经agrin反义质粒pcDNA-As-AG转染细胞后的细胞裂解液对T细胞增殖的影响.结果 (1)CVB3感染星形胶质细胞后agrin的表达水平下调.(2)病毒感染后随着agrin表达量的降低,星形胶质细胞裂解液对T细胞的活化增殖作用也降低.未转染和空质粒转染的细胞裂解液对T细胞的活化增殖有促进作用,而用反义核酸技术下调星形胶质细胞agrin表达后,星形胶质细胞裂解液对T细胞增殖的促进作用也随之下降,进一步证实agrin表达水平的下调可影响T细胞的活化和增殖.结论 CVB3感染星形胶质细胞后agrin表达水平下调,降低对T细胞活化增殖的能力,这可能是CVB3病毒性脑炎中,病毒逃逸机体免疫清除的一种机制.
-
集聚蛋白基因在不同宫颈癌细胞中的表达
目的 探讨集聚蛋白(Agrin)基因在人乳头瘤病毒(HPV)阳性和阴性宫颈癌细胞中表达的差异.方法 以人乳头瘤病毒16(HPV16)阳性的宫颈癌Caski细胞和SiHa细胞、HPV18阳性的宫颈癌HeLa细胞、HPV阴性的宫颈癌C33-A细胞为研究对象.通过Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)等方法分别检测Agrin mRNA和蛋白在不同宫颈癌细胞中的表达.结果 实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示,与HPV阴性的宫颈癌C33-A细胞比较,HPV16阳性的宫颈癌Caski和SiHa细胞、HPV18阳性的宫颈癌HeLa细胞中的Agrin mRNA和蛋白表达均显著增加(P＜0.01或0.05),Agrin mRNA和蛋白在4种宫颈癌细胞中表达的顺序为:C33-A细胞＜SiHa细胞＜Caski细胞和HeLa细胞.结论 HPV阳性的宫颈癌细胞中Agrin基因的表达显著高于HPV阴性的宫颈癌细胞,为深入研究Agrin基因与宫颈癌的关系及相关机制奠定了基础.
