首页 > 文献资料
-
刺苋花粉泛过敏原Profilin的抗原性评估与三级结构分析
目的 克隆刺苋花粉中Profilin蛋白基因,分析同源序列中不同性质氨基酸对抗原性及j级结构的贡献.方法 基于生物信息学分析已知泛过敏原Profilin的氨基酸序列并获得核心代表序列,以之为基础设计合成引物,采用Touchdown PCR技术从刺苋花粉的cDNA池中进行基因克隆,并经菌落PCR和双酶切验证;采用生物信息学软件MULTIPRED及SWISS-MODEL在线软件对所得基因编码蛋白进行抗原性评估及三级结构模拟.结果 从刺苋中获得两个序列不同的泛过敏原基因,分别命名为PRF7和PRF23.蛋白质三级结构显示:PRF7与已知的泛过敏原Profilin存在少数氨基酸的筹异,其空间结构与抗原性没有明显变化;而PRF23与北方豚草花粉泛过敏原Q64LH0之间相似程度较低,而空间结构也呈现明显的筹异;尽管Q64LH0与PRF23的伞序列抗原性均值差异无统计学意义,受一些区段上不同性质的氨基酸改变的影响,PRF23在这些区段上的抗原性显著低于Q64L-HO的抗原性.结论 基于Q64LHO和PRF23同源氨基酸序列的抗原性评估及三级结构分析,获得了不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献等信息,映射了南方花粉过敏症发牛率较低的原因所在,也为过敏原遗传改良过程中进行氨基酸置换指明了方向.
-
豚草花粉泛过敏原同源基因克隆与序列分析
目的克隆豚草花粉泛过敏原同源基因. 方法采用生物信息学分析方法对众多的花粉过敏原基因进行序列同源性比较,以序列保守区域为依据设计合成简并引物,在特殊的RT-PCR条件下,结合RACE技术对豚草花粉中的过敏原全长基因进行克隆;通过Northern杂交及序列分析初步确定基因产物是否为花粉过敏原. 结果获得了3个新的全长基因.序列分析显示:所得过敏原同源基因与数十种不同种属来源的过敏原肌动蛋白结合蛋白(profilin)具有较高的同源性,初步认定其为泛过敏原,并暂命名为Amb a 8(t).Northern杂交证实该基因在花粉中表达. 结论采用本研究方法成功地在豚草花粉中克隆到3个泛过敏原基因,为豚草花粉重组过敏原的蛋白质表达及标准化奠定了物质基础.
