您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
IRES序列文献资料
-
IRES序列连接的D-氨基酸氧化酶与绿色荧光蛋白基因导入K562e细胞的表达
内部核糖体进入位点(IRES)序列来源于脑心肌炎病毒,它可翻译一条mRNA上的两个开放读框,由其连接的两个基因的表达率相同.本实验应用以IRES序列连接D-氨基酸氧化酶(DAAO)和绿色荧光(GFP)基因构建的逆转录病毒载体,转染K562e细胞获得稳定表达GFP的单克隆细胞KDIGC和KDfGd,测定转基因细胞的荧光阳性率以及荧光强度,用D-丙氨酸(D-Ala)作用DAAO+细胞,并用酚红氧化法测定培养上清H2O2.结果表明,KDfGC和KDfaGD细胞的荧光阳性率分别为94.64%,96.31%;2×104细胞的荧光强度分别为202 U和174 U.GFP荧光强度与H2O2的产量间呈指数相关.结论:IRES序列调控的双基因可同时表达,GFP的荧光强度可以间接地反映DAAO基因的表达水平,为了解目的基因表达水平高低提供了新的方法.
关键词： D-氨基酸氧化酶基因 IRES序列 绿色荧光蛋白基因 基因转移 K562e细胞系 -
人bax基因逆转录病毒表达载体的构建及其在Hela细胞中的表达
[目的]构建带有报告基因EGFP的bax基因逆转录病毒表达载体,建立高表达bax基因的Hela细胞.[方法]通过RT-PCR方法从Hela细胞克隆bax基因,根据基因工程原理,经PCR、酶切等方法构建bax基因和报告基因EGFP双基因逆转录病毒表达载体pLBaxSN-IRES2-EGFP,转染Hela细胞后,荧光显微镜和Western Blotting检测bax基因的表达情况.[结果]成功构建了带有EGFP的bax基因的逆转录病毒表达载体,并将其转入Hela细胞.[结论]成功建立的高表达bax基因的Hela细胞株,为探讨bax基因与放射敏感性之间的关系奠定了基础.
