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血清学和分子生物学鉴定Lewis血型抗体引起的输血反应
为了分析1例溶血性输血反应产生的原因,用谱细胞和Le(a-b-)表型细胞鉴定患者血清中的抗体,用抗Lea和抗Leb血型试剂鉴定患者红细胞表型,用PCR测序方法分析LE基因(FUT3基因)全编码区序列.结果表明:患者血清中有抗Lea和抗Leb抗体,血型表型为Le(a-b-),LE基因型为无效等位基因纯合子(le59,508).结论:抗Leb抗体可引起溶血性输血反应,患者FUT3基因突变导致Le(a-b-)表型.
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FUT3-miRNA重组质粒对人胃癌KATO-Ⅲ细胞增殖的影响
目的:研究利用miRNA干扰技术抑制FUT3基因表达对人胃癌KATO-Ⅲ细胞增殖的影响.方法:将前期实验构建成功的2对针对UT3基因的特异性miRNA表达载体,用脂质体转染入人胃癌KATO-Ⅲ细胞,RT-PCR检测FUT3基因表达水平的变化；免疫细胞化学法、流式细胞术检测其合成抗原sLeA表达变化；MTT法、克隆形成实验检测FUT3基因的表达抑制对KATO -Ⅲ细胞增殖的影响.结果:转柒FUT3-miRNA的2个干扰组FUT3基因mRNA相对表达量分别为0.41±0.01,0.36±0.02,明显低于对照组(0.71±0.05)和空载体组(0.65±0.03,P＜0.05)；细胞表面合成抗原sLeA的表达水平,FUT3-miRNA1组为35.51％±0.36％,FUT3-miRNA2组为26.05％±1.14％,明显低于对照组(52.79％±2.62％)与空载体组(49.75％±1.29％,P＜0.05)；与对照组(5.60％±0.63％)和空载体组(8.90％±0.91％)相比较,FUT3-miRNA1组(38.10％±1.96％)和FUT3-miRNA2组(49.04％±2.37％)能明显抑制细胞的增殖(P＜0.05)；细胞的克隆形成能力FUT3-miRNA1组(14.10％±1.70％)和FUT3-miRNA2组(12.50％±1.96％),显著低于对照组(29.79％±3.05％)和空载体组(28.92％±2.10％,P＜0.05).结论:FUT3靶向miRNA真核表达载体可有效抑制胃癌细胞的增殖能力.
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FUT3基因靶向miRNA表达载体的构建及鉴定
背景:研究发现,Lewis血型抗原与多种恶性肿瘤关系密切,岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase ,FUTs)是参与合成Lewis抗原的关键酶,FUT3是其中之一.目的:设计并构建靶向FUT3基因的miRNA干扰质粒,为探索肿瘤基因治疗新途径奠定基础.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-05/10在济南市中心医院医学实验诊断中心完成.材料:BLOCK-iT TM Pol II miR RNAi Expression Vector Kits (含荧光基因 GFP) 、T4 DNA连接酶购自invitrogen公司;大肠杆菌菌株One Shot TOP10购自invitrogen公司.方法:根据GenBank中FUT3的序列,应用www.invitrogen.com网站的设计软件设计、合成针对FUT3 miRNA的相应Oligo DNA,退火后与BLOCK-iT TM Pol II miR RNAi Expression Vector相连接,转化感受态 E.coli TOP10 .主要观察指标:①重组质粒DNA序列分析.②质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳检测.③紫外分光光度计检测.④聚合酶链反应鉴定.结果:经测序鉴定和聚合酶链反应鉴定证实成功构建针对人FUT3基因的miRNA干扰质粒 pcDNATM6.2-GW/EmGFP- FUT3-miR;质粒DNA的琼脂凝胶电泳检测和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可以用于后续试验.结论:FUT3 靶向miRNA表达载体构建成功.
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中国人唾液血型物质与FUT2、FUT3基因多态性初步研究
目的 分析36例中国各地区健康随机人群的FUT2、FUT3及唾液ABH血型物质效价,计算FUT2、FUT3基因型检出数量及频率,唾液血型物质效价,比较不同FUT2、FUT3基因之间唾液血型物质的效价.得到FUT2、FUT3基因对于唾液血型物质效价高低的影响,并尝试探索2个基因之间的连锁关系.方法 采用中和抑制试验检测唾液中的ABH血型物质.采用基因测序方法检测FUT2、FUT3基因.计算不同FUT2、FUT3基因型唾液血型物质的均值和SD值,使用t检验比较不同FUT2、FUT3基因之间唾液血型物质的效价.结果 36例标本中,FUT2基因测序检出SeSe、SeSew、SewSew,未发现se基因单倍型.FUT3基因测序检出LeLe、Lele、lele.唾液血型物质效价n分布在-2.2-15.5之间(2n).结论 Se基因对于唾液血型物质效价影响较大,Se基因能够影响个体体液中血型物质的分泌,无论纯合或杂合,影响力无显著差异.而Le基因的影响力远小于Se基因.
