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鲍曼不动杆菌外膜蛋白W的克隆表达及纯化
目的 通过基因克隆方法制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白W(outer membrane protein W,OmpW),为研究其生物学活性及耐药机制奠定实验基础. 方法 通过PCR方法扩增鲍曼不动杆菌临床株A1株的外膜蛋白W基因(OmpW),构建原核表达载体pET30a/ompW,采用PCR方法和测序鉴定扩增产物.筛选阳性表达载体后转化至大肠埃希菌表达宿主菌BL21中,IPTG诱导表达重组蛋白并进行纯化. 结果 pET30a/ompW原核表达重组载体构建成功,基因测序鉴定,其在原核表达系统中高表达,表达产物分子质量单位约为43 ku,与预期值相符.表达产物经8 mol/L尿素和Tris-HCl处理纯化,得到高纯度的重组OmpW蛋白. 结论 成功构建鲍曼不动杆菌OmpW蛋白基因重组原核表达系统,并获得高纯度的重组OmpW蛋白,为研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白W的生物学活性以及耐药机制奠定了基础.
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霍乱弧菌外膜蛋白W的原核表达及抗原性分析
目的 在大肠杆菌中表达霍乱弧菌种特异性外膜蛋白(Omp)W,纯化后制备检测用OmpW抗体.方法 采用PCR法以霍乱弧菌基因组为模板扩增ompW基因,插入表达载体pET-32a( + )的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-32a-ompW;重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导获得目的 蛋白,纯化后免疫新西兰大耳白兔,制备OmpW的多克隆抗体并进行鉴定.结果 扩增得到ompW基因片段,并成功构建pET-32a-ompW原核表达系统,重组蛋白OmpW以包涵体形式高效表达;制备的OmpW抗体能与天然的O1群和O139群霍乱弧菌结合.结论 霍乱弧菌OmpW可由原核系统高效表达,免疫获得的抗体具有较好的效价,为进一步制备霍乱弧菌检测用抗体奠定基础.
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鲍曼不动杆菌外膜蛋白W多克隆抗体的制备及鉴定
目的：：制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白W( OmpW)多克隆抗体，为进一步研究OmpW在鲍曼不动杆菌多重耐药及致病机制中的作用提供基础。方法：在Pubmed检索OmpW信息，选取外膜蛋白W特定的氨基酸区域合成多肽后偶联蓝色载体，并作为免疫原免疫新西兰大白兔，得到抗血清并进行纯化。采用5株鲍曼不动杆菌临床分离株的菌体蛋白对抗体进行鉴定。结果：偶联多肽的蓝色载体构建成功，经动物免疫后得到抗血清，经纯化后得到高纯度的OmpW多克隆抗体。经临床分离鲍曼不动杆菌菌体蛋白验证，证实得到理想的兔抗OmpW多克隆抗体。结论：通过多肽合成制备免疫原方法及动物免疫，成功获得了特异性高的多克隆抗体，为进一步研究鲍曼不动杆菌OmpW蛋白在不同鲍曼不动杆菌临床株中的分布特征及其抗体的保护效应奠定了基础。
