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Tp0259文献资料
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梅毒螺旋体Tp0259假定蛋白的原核表达、纯化及活性研究
目的 表达、纯化梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0259 (rTp0259),鉴定其免疫原性,并探讨其在梅毒血清诊断中的价值.方法 PCR扩增tp0259基因,构建pET-28a(+)/Tp0259原核表达载体,转化至E.coli BL21中诱导表达.采用Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,并进行Western blot鉴定.以重组蛋白Tp0259为抗原,采用Western blot方法检测梅毒患者血清(一期梅毒患者血清21份,二期梅毒患者血清13份,潜伏梅毒患者血清6份,并与梅毒诊断金标准比较).结果 PCR扩增获得600 bp左右大小的目的基因片段并成功构建原核表达载体pET28a-Tp0259,经诱导高效表达分子质量单位为28 ku的重组蛋白.Western blot证实该重组蛋白为Tp0259假定蛋白,能被梅毒患者血清识别.以Tp0259为抗原采用Western blot检测梅毒患者血清特异性抗体结果与梅毒诊断金标准(临床症状、病史结合血清学诊断方法)间的κ值为0.944,表明这两种方法检测结果的一致性较好.结论 成功表达、纯化了可溶性rTp0259,该蛋白具有良好的免疫反应性并具有较高的血清学诊断价值.
