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锁核酸捕获TaqMan探针实时聚合酶链反应构建及检测乙型肝炎病毒DNA
建立和检测新型乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测技术锁核酸(LNA)捕获TaqMan探针实时聚合酶链反应(PCR)。方法 2009年8月至2010年3月选取本院20例健康献血者和肝病专科住院的75例经COBAS Amplicor检测HBV DNA阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者,分别采集血液样本进行LNA捕获TaqMan探针实时PCR特异性试验。同时对LNA-实时PCR方法的重复性、特异性和线性范围等进行分析。结果 其线性范围为10～2.3×109 IU/ml。将10 IU/ml作为检测下限,具有95％可信区间。线性回归分析显示其斜率接近1.0 (R2=0.999)。批内变异值为3.88％～4.36％,批间变异值为8.5％～11.7％。20例健康献血者的阴性对照血清HBV-DNA检测均为阴性,而75例经COBAS Amplicor检测HBV DNA阳性患者的血清样本除1例阴性外,其余都为阳性。结论 LNA捕获TaqMan探针实时PCR方法为HBV-DNA检测的一种快捷灵敏、准确度高的新方法,值得临床实验室推广应用。
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半巢式PCR扩增ITS2区对50例真菌性角膜溃疡的病原学鉴别
目的 应用半巢式PCR扩增ITS2 区方法对50例真菌性角膜溃疡患者进行病原学鉴别,探讨其应用价值.方法 收集50例真菌性角膜溃疡患者及3种真菌标准菌株培养物,分别提取菌株基因组DNA,半巢式PCR扩增ITS2区,扩增产物经测序后,结果与NCBI基因库中的核酸序列进行比对,确定致病菌的种属,并进一步对其分布特征进行分析.结果 3种真菌标准菌株的测序结果与基因库中一致.50例真菌角膜溃疡患者主要致病菌依次为:镰刀菌属感染24例(其中茄病镰刀菌感染17例,尖孢镰刀菌感染6例,串珠镰刀菌感染1例),占 48％；曲霉菌属感染10例(其中黄曲霉感染5例,聚多曲霉感染3例,构巢曲霉感染2例),占20％；青霉菌属感染6例(其中黄绿青霉菌感染2例,多色青霉菌感染2例,草酸青霉菌感染2例),占 12％；念珠菌属感染5例(其中白念珠菌感染3例,近平滑念珠菌感染2例),占10％；枝孢霉菌属感染3例(其中草本枝孢霉感染2例,枝状枝孢霉感染1例)；粗糙链孢霉感染1例；互隔交链孢霉菌感染1例.结论 半巢式PCR扩增ITS2区能快速、简便、准确地鉴别诊断真菌性角膜溃疡,为个性化治疗及本地区真菌的流行病学调查奠定基础.
