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培养鼠腺垂体细胞的形态和分泌功能实验研究
目的利用细胞培养技术,对大鼠腺垂体细胞进行体外培养,进而确定腺垂体细胞在体外生长的佳时机,为垂体移植细胞库的建立以及垂体移植的应用提供实验依据.方法取大鼠腺垂体细胞做体外培养,动态观察培养细胞的生长状态,通过RIA和免疫化学染色技术,评价体外培养的垂体细胞的功能状态.结果培养液中GH、LH的含量在培养的第7天高,为9.49±2.21(ng/ml)和7.83±1.51(ng/ml),以后逐渐下降.免疫化学染色证实分散培养后的垂体细胞中有多种激素细胞的生长.结论培养至第7天的腺垂体细胞分泌GH、LH的功能状态为佳,提示适于进行移植或保存.
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Cu2+对离体培养猪腺垂体细胞GH分泌的影响
目的:研究铜离子(Cu2+)对离体培养猪腺垂体细胞生长激素(GH)分泌的影响.方法:试验选取32-35日龄仔猪腺垂体细胞,于10%小牛血清的Dulbecco MEM培养液(DMEM)中离体培养48 h.之后用含不同浓度Cu2+(0 mg/L、0.025 mg/L、0.1 mg/L、0.4 mg/L、1.6 mg/L)的无小牛血清DMEM培养液培养36 h,于12 h、24 h、36 h收集细胞培养液,用Linco公司的试剂盒及放射免疫法测定培养液中GH浓度.结果:铜离子离体培养腺垂体细胞24 h,0.025 mg/L、0.1 mg/L、0.4 mg/L组培养液中GH浓度均高于0 mg/L组,其中0.1 mg/L组与0 mg/L组差异显著(P＜0.05).结论:铜离子可促进离体培养猪腺垂体细胞分泌GH.
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分泌生长激素和催乳素的奶牛腺垂体细胞的分离鉴定及特征分析
目的 获得具有生长激素(growth hormone,GH)和催乳素(prolactin,PRL)分泌功能的奶牛腺垂体细胞(dairy cow anterior pituitary cells,DCAPCs),并对其进行鉴定和特征分析.方法 采用免疫组织化学方法对奶牛腺垂体中GH和PRL分泌细胞进行定位,利用酶消化法对其所在部位进行消化,获得的细胞经分离培养后,用形态学方法和免疫组织化学方法进行鉴定,并分析其传代性能;采用实时荧光定量PCR及ELISA方法对其GH和PRL合成和分泌特征进行分析.结果 GH分泌细胞主要位于腺垂体侧翼区下缘,而PRL分泌细胞主要位于腺垂体侧翼区上缘.获得的DCAPCs接种培养2d后,可见形状规则的铺路石样上皮细胞,经免疫组织化学法鉴定,可分泌GH和PRL,经多次传代后仍可表达GH和PRL,但表达水平随代次增加而降低.结论 成功建立了DCAPCs分离培养方法,可用于体外研究奶牛GH和PRL合成及分泌的调控机制.
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人胚腺垂体细胞库的初步建立
日的初步探讨建立人胚腺垂体细胞库的方法及冷冻移植物复温后的形态和功能.方法将人胚腺垂体细胞培养至第5天冷冻,15天后复温再培养,与单纯培养组相对照,相差显微镜下观察细胞形态,苔盼蓝测拒染率及检测激素分泌功能.结果冷冻复温后垂体细胞存活率平均达78.2%;光镜下生物学状态无改变;GH分泌细胞复温后第5～7天状态佳;PRL、TSH分泌水平差.结论本方法适于建立人胚腺垂体细胞库用于治疗垂体性侏儒症,移植时机为复温后5～7天.该冷冻方法不适用于PRL分泌细胞,培养条件不适用于TSH分泌细胞.
