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广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1的表达
将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)基因克隆至表达载体pET28a(+),转化入大肠杆菌BL21,经过诱导,SDS-PAGE检测,重组质粒pET28a-APLA2-1在18KD有一明显的表达条带,表达产物APLA2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在,将产物变复性后用Sephadex G-75 纯化,产物经过SDS-PAGE检测只有单一条带,通过Western-blot检测,证实纯化产物是酸性磷脂酶A2.对表达的APLA2进行酶活性和药理活性的测定.至此我们在大肠杆菌中表达了广西眼镜王蛇毒APLA2,这将为以后对PLA2的结构与功能的研究打下了良好的基础.
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广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1在不同载体的表达
目的 构建广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)在不同载体的重组表达质粒,在E.coli中表达APLA2-1并比较不同表达系统对APLA2-1的表达效果.方法 将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)基因克隆至表达载体pBLMVL2和pET28a(+),分别转化入大肠杆菌RR1和BL21,经过诱导表达,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)及Western blot观察重组蛋白表达情况.结果 成功构建了重组质粒pBLMVL2-APLA2-1和pET28a-APLA2-1.pBLMVL2-APLA2-1在SDS-PAGE上没见明显表达带,在Western blot上可见一14 kD的表达带.pET28a-APLA2-1在SDS-PAGE上有一明显的18 kD表达条带,表达产物APLA2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在.结论 APLA2-1可在大肠杆菌中表达,pET28a(+)对APLA2-1的表达效果优于pBLMVL2.
