首页 > 文献资料
-
脂联素改善低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞功能障碍及机制研究
目的 研究重组人球状脂联素(APN)改善低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)功能障碍,探讨其潜在的分子机制.方法 取SD雄性大鼠PMVECs原代培养,传至第三代行细胞鉴定;PMVECs分3组,常氧(210ml/L O2,37℃)组;低氧(20 ml/L O2,37℃)组;低氧(20 ml/L O2,37℃) +APN(1 μg/ml)处理组,分别培养3h、6h、9h和12h,收集细胞上清测NO浓度;3组PMVEC行I3T-PCR测定eNOS基因表达;BCA法测定各组总蛋白含量;行Western blot检测AMPK/p-AMPK、PI3K/p-PI3K、Akt/p-Akt和eNOS/p-eNOS表达.结果 ①鉴定培养细胞为PMVECs;②在相应时间点,与正常组比较,低氧诱导的NO浓度、eNOS mRNA表达水平、总蛋白表达显著下降(P＜0.01);与低氧组对比,低氧+ APN组显著增加了低氧诱导的NO浓度、eNOS mRNA表达水平、总蛋白表达(P＜0.01);③3组AMPK、PI3K、Akt和eNOS总蛋白表达水平不变;与正常组比较,低氧诱导的AMPK、PI3K、Akt、eNOS磷酸化表达水平下降(P＜0.05);与低氧组对比,低氧+APN组增加了低氧诱导的AMPK、PI3K、Akt、eNOS磷酸化表达水平(P＜0.05).结论 在细胞水平上,APN能改善低氧条件下诱导的PMVECs功能障碍,促进肺血管具有舒张作用的NO产生,其可能机制可能是伴随着AMPK/PI3 K/Akt/eNOS/NO信号通路的激活,APN可能成为潜在治疗低氧性肺动脉高压的辅助药物.
-
脂多糖对肺动脉内皮细胞Ⅰ型Na+/H+交换器表达的影响
目的:探讨脂多糖(LPS)对培养的牛肺动脉内皮细胞(PAEC)Ⅰ型Na+/H+交换器(NHE-1)表达的影响及其与内皮细胞死亡的关系.方法:体外培养牛PAEC,MTT比色检测细胞存活率,并提取总RNA,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及DNA电泳技术,以NHE-1与β-actin电泳条带光密度值之比(e/c)作数据分析,以其比值反映NHE-1 mRNA的表达程度.应用Fluo3/Amy荧光探针标记,激光共聚焦观察细胞内钙离子的浓度.结果:在LPS(0.01～1.0 μg/ml)作用48 h后,MTT比色吸光度值分别为0.35±0.07,0.31±0.07,0.26±0.04,低于对照组0.44±0.06(P<0.01).e/c分别为0.43±0.11, 0.83±0.14,1.22±0.19,高于对照组0.28±0.08(P<0.01,n=4).激光共聚焦结果显示LPS引起细胞内钙离子增多,呈剂量依赖型.结论:LPS可以引起肺动脉内皮细胞NHE-1表达增加,抑制细胞增殖,导致细胞死亡,钙离子可能参与NHE-1的激活及表达.
关键词： 脂多糖 Ⅰ型Na+/H+交换器 肺动脉内皮细胞 钙离子 -
缺氧肺动脉内皮细胞纤溶系统的变化及卡托普利对其的影响
