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我国八代按蚊及其近缘种rDNA-ITS2序列差异和分类地位的探讨
对采用自四川、辽宁、山东及韩国的八代按蚊和四川的筠连按蚊,进行核糖体DNA第2内转录间隔区(rDNA-ITS2)序列差异分析.结果显示:四川、辽宁及对照韩国八代按蚊群体间的ITS2序列同源性达96.7%～99.6%;筠连按蚊与各地(除山东外)八代按蚊间序列同源性达96.2%～99.8%,与四川同域的八代按蚊除一个碱基缺失外,rDNA-ITS2序列完全相同,显然属于种内变异水平,筠连按蚊可能是八代按蚊的同物异名:而山东八代按蚊与各地八代按蚊相比则同源性仅70.4%～71.1%,差异明显增大,提示山东的"八代按蚊"为一存疑蚊种,其分类地位尚需要进一步研究确定.
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PCR技术在赫坎按蚊复合体近缘种鉴别中的应用
目的应用聚合酶链反应(PCR)技术分析湖北省不同地区媒介按蚊的种型.方法采用传统的形态学方法和新建立的基因鉴别技术对现场捕获的按蚊分别进行形态特征鉴别和基因鉴别及比较.结果现场捕获181只按蚊,形态学确认176只为中华按蚊,而PCR鉴定172只为中华按蚊,另4只为八代按蚊;经形态学特征鉴别的5只嗜人按蚊中,PCR鉴别有4只为嗜人按蚊,另1只为八代按蚊.结论采用PCR基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、八代按蚊等近缘种按蚊,较传统的按蚊形态学鉴别方法准确,适用于复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测.
关键词： 嗜人按蚊 中华按蚊 八代按蚊 核糖体核酸内转录间隔2 聚合酶链反应 -
山东荣成八代按蚊分类地位的探讨
目的 探讨山东荣成八代按蚊的分类地位.方法 于2009年8月底在山东荣成西郊王家村采集饱血八代按蚊,饲养得子代,对子代成蚊进行形态学鉴定.抽提各型成蚊足的DNA,PCR扩增rDNA-ITS2片段后测序,并用DN Astar7.1软件对所获荣成八代按蚊的rDNA-ITS2序列与文献记录的山东荣成八代按蚊(YSD,AY306128)、四川省八代按蚊(YSC,AY 170925)、辽宁省八代按蚊(YLN,AY 170923)和韩国八代按蚊(YK,AF146749)的相关序列进行多重比对.结果 共采集饱血八代按蚊56只,其中7只顺利产卵,饲养共获得子代成蚊354只,包括八代按蚊型(Y型,成蚊翅脉端白斑和V5.2顶繸白斑均有)240只、近黑按蚊型(P型,两者均无)8只和杂合型(H型,两者其一)106只.亲本和子代成蚊各型间rDNA-ITS2段序列(JN865249,JN865246,JN865247,JN865248)同源性为98.7～100％,与四川省八代按蚊、辽宁省八代按蚊和韩国八代按蚊的rDNA-ITS2段序列同源性分别为98.5％～99.3％、98.7％～99.6％和98.7％～ 100％,而与原山东荣成八代按蚊同源性仅为67.1％～68.5％.结论 山东荣成的八代安蚊形态具有Y型、P型和H型等不同翅斑形态表型,但其rDNA-ITS2序列特征均与近黑按蚊近缘,可推断当地有近黑按蚊分布.
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PCR-RFLP技术用于鉴别赫坎按蚊复合体近缘种按蚊的研究
目的区别赫坎按蚊种团内近缘种.方法应用聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)技术,对辽宁省现场捕获的按蚊用特异性ITS2引物进行PCR扩增,限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ消化,琼脂糖凝胶电泳分析.结果中华按蚊的PCR扩增产物能被限制性内切酶RsaⅠ酶切成350 bp和200 bp两条酶切DNA条带;嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)的PCR扩增产物能被限制性内切酶HinfⅠ酶切成410 bp的酶切DNA条带; 雷氏按蚊的ITS2基因PCR扩增产物能分别被限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ酶切,分别显示350 bp和400 bp的酶切DNA条带;八代按蚊的PCR扩增产物没有显示明显的限制性内切酶RsaⅠ或HinfⅠ酶切条带.结论依据rDNA的ITS2区段基因特征建立的PCR-RFLP技术可用于鉴别赫坎按蚊种团的中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4个近缘种按蚊.
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一种简便的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别新技术
目的建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内不同近缘种按蚊的基因鉴别技术.方法依据赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊ITS2区段的基因序列特征设计特异性引物,建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊的简便的PCR基因鉴别技术,并采用传统的形态学分类方法和新建立的基因鉴别技术对从辽宁、河南省以及在朝鲜现场捕获的按蚊分别进行了形态学和基因鉴别及比较.结果与结论新建立的基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊.具有比传统的形态学分类方法准确,比已有的PCR-RFLP蚊种基因鉴别技术更简便、价廉和省时的特点.适用于不同的复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测.
