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蜱IgG结合蛋白的昆虫细胞表达及结合IgG特性分析
蜱吸食宿主大量血液,其中宿主血液中IgG分子能穿过蜱肠道,进入血淋巴,且能保持其活性.为逃避宿主免疫攻击,蜱唾液腺分泌一种免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin G binding protein,IGBP),与蜱体内的宿主IgG结合,抑制宿主IgG对蜱的损害,是蜱唾液腺重要的功能分子,也是抗蜱疫苗候选分子.镰形扇头蜱是我国南方的优势蜱种,其唾液腺免疫球蛋白结合蛋白(RH-IGBP)被鉴定为抗蜱免疫保护性抗原,为进一步了解其生物学功能,本研究应用杆状病毒表达系统,构建出重组杆粒Bacmid-IGBP,并在昆虫细胞中表达出真核重组蛋白RH-IGBP,经免疫荧光实验鉴定和Western blot分析,重组蛋白大小为23kDa,与预期一致.重组蛋白经纯化,利用ELISA方法,研究重组蛋白与不同哺乳动物宿主(兔、猪、牛羊、鼠、犬)和人的IgG结合能力,发现RH-IGBP与不同宿主IgG结合能力不同,与兔、猪的IgG有明显结合能力.对来自兔源IgG不同酶切片段F(ab′)2 和Fc与RH-IGBP结合特性分析表明,蜱IgG结合蛋白主要识别部位是IgG的F(ab′)2片段.这些结果初步揭示了蜱IgG结合蛋白的作用机制和特点.
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镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆与表达分析
本实验以镰形扇头蜱吸血前后雄蜱唾液腺的抑制消减杂交cDNA文库中的EST数据为基础,应用RACE方法从镰形扇头蜱体内克隆出一个IgG(IgG binding protein,IGBP)基因的全长序列,该基因全长683bp,编码178个氨基酸,预测分子量为19.5 kDa,经同源性比较该基因与具尾扇头蜱的IGBP-MB基因序列的同源性高达92%.用RT-PCR方法分析了该基因表达的性别特异性、各个器官、不同发育阶段的表达情况,结果表明,该基因表达没有性别特异性;IGBP基因在唾液腺、壳这2个器官有所表达,但在肠中却没有表达;在蜱的各个发育阶段均有表达.
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室内饲养条件下三种硬蜱产卵和孵化特性的比较研究
目的:为了认识微小牛蜱和扇头蜱之间的关系.方法:在室内饲养条件下对微小牛蜱(Boophilus microplus)、镰形扇头蜱指名亚种(Rhipicephalus haemaphysaloides haemaphysaloides)和猛突血蜱(Haemaphysalis montgomeryi)的产卵和孵化特性进行了比较研究.结果:三种硬蜱在产卵期天数上差异不明显(p＞0.05),而在孵化期上有极显著差异(p＜0.01);微小牛蜱和镰形扇头蜱间除了吸血后体重(p＜0.05)、产卵前期(p＜0.01)、孵化期(p＜0.01)外,其余参数均差异不明显(p＞0.05);猛突血蜱与微小牛蜱间仅在产卵前期和产卵期天数上差异不显著(p＞0.05),与镰形扇头蜱间仅在产卵期天数上差异不明显(p＞0.05),其余各项参数间都有显著或极显著差异;猛突血蜱的生殖效率和孵化率均明显高于微小牛蜱和镰形扇头蜱(p＜0.05).此外,三种硬蜱不仅日产卵量曲线相似,而且产卵量与吸血后体重之间均存在着极显著的正相关关系(r＞0.93,p＜0.01).结论:微小牛蜱和扇头蜱之间有较高的相似度.
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天台县主要蜱媒传染病血清流行病学调查
蜱类是仅次于蚊虫的第二大疾病传播媒介,可以传播病毒、细菌、寄生虫等多种病原体[1].天台县气候条件适宜蜱类生存,曾在家畜和野生动物体表捕获长角血蜱、龟形花蜱、中华硬蜱、镰形扇头蜱及血红扇头蜱等多种蜱类,而且有研究者从蜱中检测到巴尔通体、伯氏疏螺旋体、埃立克体等多种蜱传病原体[2].为进一步调查天台县蜱媒传染病在人群和家畜中的感染情况,在浙江省疾病预防控制中心(疾控中心)的支持和指导下,天台县2009年在山区石梁、雷峰两个乡镇采集人群与家畜血清标本,并由省疾控中心送中国疾控中心检测,现将调查情况报告如下.
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镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA文库的构建
目的为了筛选抗蜱及蜱传疾病基因工程疫苗的抗原候选分子,构建了镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库.方法用Trizol试剂提取镰形扇头蜱半饱血雌蜱总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用长链PCR(LD-PCR)扩增方法,合成双链cDNA.双链cDNA(ds cDNA)在SfiⅠ内切酶的作用下,形成两端分别带有SfiⅠA和SfiⅠB的粘性末端.经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集500bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有SfiⅠA和SfiⅠB末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA噬菌体表达文库.结果经测定,库容量为4.2×106,重组率为96%.扩增后的文库滴度为2.04×1010pfu/ml.通过对文库中随机挑选的15个克隆进行序列分析,获得一个编码线粒体ATP酶第6亚基蛋白的全长cDNA序列.结论结果显示,镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库已构建成功.
