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豹蛙酶文献资料
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豹蛙酶的抗肿瘤作用研究进展
豹蛙酶(onconase)又称抗瘤酶、P30 蛋白等,属核糖核酸酶 A超家族成员.豹蛙酶是目前唯一用于临床试验阶段的核糖核酸酶,它的核糖核酸酶活性低,细胞毒性较强,对体内外多种肿瘤有很强的杀伤作用,是当前全球重点研究的 100 种新药之一.豹蛙酶在北极蛙的早期胚胎中被首次发现,它主要通过破坏RNA从而抑制蛋白质合成,诱导肿瘤细胞凋亡,此外还有其他抗肿瘤机制,如影响特定基因的表达和破坏端粒酶RNA.豹蛙酶和其他抗癌药物联合应用会增强抗癌药物的抗肿瘤细胞毒性.目前,豹蛙酶对小细胞肺癌和其他实体肿瘤的治疗处于Ⅰ期或Ⅱ期临床试验,对恶性间皮瘤的治疗处于Ⅲ期临床试验阶段,是潜在的治疗恶性间皮瘤的药物.
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重组豹蛙酶的制备及其生物学特性分析
目的:通过构建豹蛙酶原核表达载体pColdⅡ-Rap,表达、纯化豹蛙酶并研究其生物学活性.方法:合成豹蛙酶全基因序列,克隆于原核表达载体pColdⅡ中,鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21,用SDS-PAGE和Western blot验证豹蛙酶的表达；大量表达重组豹蛙酶融合蛋白(Rap-His),通过MTT法分析Rap-His对乳腺癌细胞增殖的影响.结果:成功构建了pColdⅡ-Rap原核表达载体,经优化表达、纯化的条件,获得纯度较高的Rap-His; MTT法检测结果表明,该融合蛋白在320、160 μg/ml时对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率在加药后4d达到93.49％.结论:本研究制备的重组Rap-His融合蛋白能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖.这为进一步与肿瘤特异抗体偶联,构建肿瘤特异性靶向药物的研究奠定了基础.
