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人参皂苷Rg1通过自噬抑制Raw 264.7巨噬细胞凋亡
目的 探讨人参皂苷Rg1在血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡中的作用及其机制.方法 体外培养小鼠Raw 264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+不同时间(24、36和48h)血清剥夺处理组;依据佳血清剥夺时间进一步分为空白对照组、血清剥夺(36h)处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+血清剥夺(36h)处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+血清剥夺(36h) +3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5mmol/L,1h)处理组.采用Western blotting检测LC3、Atg 5、Beclin 1、cleaved Caspase-3、Bel-2及Bax蛋白水平的表达变化;采用免疫荧光双标记检测细胞内LC3蛋白水平表达的变化;采用Hoechst 33342/PI荧光双染检测细胞凋亡的变化.结果 不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺诱导Raw264.7巨噬细胞凋亡;与血清剥夺处理组相比,人参皂苷Rg1处理组LC3、Atg 5及Beclin 1蛋白表达水平显著上调;加入3-MA抑制剂后,凋亡细胞较人参皂苷Rg1处理组明显增多,且Bcl-2蛋白表达水平明显下调的同时,cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达水平则显著上调.结论 人参皂苷Rg1通过促进血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬,发挥抗凋亡的保护作用.
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S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉安对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响
目的 观察S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)对RAW 264.7诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨NO在动脉粥样硬化(炎症)过程中的作用.方法 以RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组,采用不同浓度(30、100、300、400、500μmol/L)的SNAP对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW 264.7巨噬细胞iNOS mRNA的表达,采用Western blotting技术检测iNOS蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,不同浓度SNAP(30、100、300、400、500 μmol/L)组iNOS mRNA的表达比空白对照组均明显降低(P＜0.05),不同浓度SNAP(30、100、300 μmol/L)组iNOS蛋白表达明显低于空白对照组(P＜0.05).结论 NO可以抑制巨噬细胞自身iNOS mRNA基因转录,降低iNOS的合成而发挥负反馈作用.
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塞来昔布对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型炎症因子的影响
目的 建立脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症模型,探讨塞来昔布对其分泌炎症因子的影响.方法 培养小鼠RAW 264.7巨噬细胞,采用1μg/ml的LPS刺激小鼠RAW 264.7巨噬细胞24 h后,收集细胞培养基,采用Griess法测定一氧化氮(NO)及ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的含量,从而建立LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症模型.采用MTT法检测塞来昔布对LPS刺激的RAW 264.7巨噬细胞的毒性作用后,选用8.00 μmol/L塞来昔布预处理细胞1h,再加入1μg/ml LPS刺激细胞24 h,收集细胞培养基,测定培养基中炎症因子NO、TNF-α及PGE2的含量.结果 1μg/ml的LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞24 h后,细胞形态出现明显变形,细胞培养基中炎症因子NO及TNF-α、PGE2含量均较正常对照组明显增高(P＜0.01).与DMSO溶剂对照组相比,8.00μmol/L塞来昔布组能明显抑制LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎性因子NO、TNF-α及PGE2的释放(均P＜0.01).结论 成功建立LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症模型,塞来昔布可明显抑制其炎症因子NO、TNF-α及PGE2的分泌.
