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中华大蟾蜍小肠黏膜上皮斯钙素-1基因表达与质膜Ca2+-ATP酶活性分析
目的 探讨小肠黏膜上皮斯钙素-1(STC1)基因表达与质膜Ca2+-ATP酶活性的关系.方法 基于耐受实验结果,将72只成体中华大蟾蜍随机分为高钙环境组(加0.1 mol/L CaCl2的自来水)、低钙环境组[加0.03mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)的自来水]及正常对照组(自来水),分别于暴露前及暴露后12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h取血浆和小肠黏膜,利用比色法和半定量RT-PCR法分别检测血浆钙水平、质膜Ca2+-ATP酶活性和STC1 mRNA表达水平.结果 0.1mol/L氯化钙暴露致中华大蟾蜍血浆钙水平在12h和24h时显著高于对照组水平(1.9mmol/L)(P<0.05),48h时回复至正常,72h后持续升高;而12 ～ 48h内小肠黏膜上皮质膜Ca2+-ATP酶活性增强和STC1 mRNA水平上调,72h后回复至正常水平.0.03mol/L EDTA暴露则使中华大蟾蜍血浆钙水平下降,但质膜Ca2+-ATP酶活性和STC1 mRNA水平与对照组相比未出现明显变化.结论 血浆钙水平升高致小肠黏膜上皮质膜Ca2+-ATP酶活性升高,进而增强STC1表达,而STC1表达上调又以负反馈方式抑制质膜Ca2+-ATP酶的活性.
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环境钙对中华大蟾蜍肾脏斯钙素-1基因表达与质膜Ca2+-ATP酶活性的影响
目的 探讨血浆钙水平对肾组织斯钙素-1( STC1)基因表达与质膜Ca2+ -ATP酶(PMCA)活性的影响. 方法 将72只成体中华大蟾蜍随机分为3组,分别暴露于添加0.1 moL/L CaCI2的自来水、添加0.03mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)的自来水及自来水中,于暴露前及暴露后12、24、48、72、96、120和144h取血浆和肾脏,利用比色法和半定量RT-PCR法分别检测血浆钙水平、PMCA活性和STCl mRNA水平,利用免疫组织化学染色确定STC1免疫反应. 结果 0.1mol/L CaCl2暴露致中华大蟾蜍血浆钙水平在12和24h时升高,48h时降至正常水平,48h后持续升高；12 ～ 48h内肾组织PMCA活性增强,STC1 mRNA水平上调,72h后回复至正常水平.而0.03mol/L EDTA暴露则引起血浆钙水平下降,但肾组织PMCA活性和STC1 mRNA水平与对照组相比未出现明显变化.免疫组织化学技术显示,肾脏远曲小管和集合管上皮细胞出现STC1免疫反应,且0.1mol/L CaCl2暴露可致STC1免疫反应增强. 结论 血浆钙水平升高致肾小管和集合管上皮细胞PMCA活性增强,STC1表达上调,而STC1表达上调又使血浆钙水平下降；但血浆钙水平持续升高则使PMCA活性下降,STC1基因表达下调.
关键词： 肾脏 斯钙素 质膜Ca2+-ATP酶 反转录-聚合酶链反应 免疫组织化学 中华大蟾蜍 -
质膜Ca2+-ATP酶异构体2基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系
目的探讨质膜Ca2+-ATP酶异构体2(PMCA2)基因多态性与噪声性听力损失的关系.方法采用横断面流行病学研究方法,对194名噪声暴露作业工人进行调查和听力测试,按听力学评价的结果将其分为听力损失组和听力正常组;用多聚酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法和等位基因特异扩增法(ASA)检测其PMCA2基因上rs2289274和rs6790640两个单核苷酸位点的多态性.结果在93名噪声性听力损失的工人中,rs2289274位点AA、AG和GG基因型的频率分别为16.1%、40.9%和43.0%,等位基因A和G的频率为36.6%和63.4%;在101名听力正常的工人中,其基因型频率分别为15.8%(AA)、32.7%(AG)和51.5%(GG),等位基因频率为32.2%(A)和67.8%(G).rs6790640位点在噪声性听力损失组CC、CT和TT基因型的频率分别为0、 82.8%和17.2%,等位基因C和T的频率为41.4%和58.6%;在听力正常组的基因型频率分别为1.0%(CC)、 76.2%(CT)和22.8%(TT); 等位基因频率为39.1%(C)和60.9%(T).两位点的基因型分布及其等位基因频率在噪声性听力损失组与听力正常组之间差异均无显著性(P＞0.05).采用多元Logistic回归对两组间年龄、性别、吸烟状况、爆震史和累积噪声暴露量等因素进行校正后,未发现两位点中任一基因型的噪声性听力损失的危险度有显著性升高(P＞0.05).结论 PMCA2基因rs2289274和rs6790640两个单核苷酸位点的多态性可能不是噪声性听力损失的遗传易感性因素.
