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miR-320在肿瘤发生和发展中的作用及分子机制
miR-320是一类新发现的microRNA.近年来,多种肿瘤中都发现了miR-320的异常表达.因此其在疾病发生发展中的作用及其分子机制也受到越来越多的关注.
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miR-320在结直肠癌中的表达及意义
目的:探讨miR-320与结直肠癌临床病理因素间的关系,寻找其下游调控蛋白,及对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响.方法:采用RT-PCR检测83例结直肠癌组织及癌旁组织中miR-320的表达,结合结直肠癌临床病理指标分析其相关性,用miR-320病毒转染HCT-116及ClonA1两株结直肠癌细胞系,Western blot检测其调控蛋白C-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达,采用四甲基偶氮唑蓝显色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测LV-miR-320细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)化疗的敏感性.结果:83例结直肠癌标本中miR-320的表达明显低于癌旁组织表达(P=0.012).miR-320表达与肿瘤分化程度相关,高分化组织中表达较中低分化组织高,与局部浸润深度及TNM分期相关(P=0.012,P=0.004),但不受患者性别、年龄、肿瘤的大小及位置的影响;获得LV-mi R-320稳定转染细胞株及阴性对照株(negative control,NC),Western blot结果显示LV-miR-320组JNK表达明显降低;LV-miR-320组HCT-116及ClonA1半数抑制浓度(IC50值)分别为11.34 μg/mL和12.56 μg/mL,NC组IC50值分别为24.73 μg/mL和25.34 μg/mL(P=0.023,P=0.018).结论:miR-320在结直肠癌组织中呈低表达,其在结直肠癌细胞中过表达后,可明显抑制JNK蛋白翻译,而显著增加细胞对5-Fu化疗的敏感性.提示miR-320在结直肠癌的发生发展及治疗中起重要作用.
关键词： miR-320 C-Jun氨基端激酶 结直肠癌 化疗敏感性 -
miR-320及下游靶基因survivin在银屑病皮损中的表达
目的：检测寻常性银屑病皮损中miR-320及其下游靶基因survivin mRNA的表达水平。方法采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测40例寻常性银屑病患者皮损及40名健康对照皮肤中miR-320、survivin mRNA的表达水平，运用双荧光素酶报告实验验证survivin是miR-320的靶基因。miR-320和survivin表达水平两组间比较采用t检验，寻常性银屑病皮损中miR-320与survivin表达的相关性采用Pearson相关分析。结果与健康对照皮肤相比，寻常性银屑病皮损中miR-320表达量为对照组的（0.561±0.11）倍，表达明显下调（t=3.06，P＜0.05）；survivin mRNA表达量为对照组的（2.034±0.26）倍，表达水平明显上调（t=3.35，P＜0.05）；双荧光素酶报告实验结果提示survivin是miR-320的靶基因，寻常性银屑病皮损中miR-320与survivin mRNA呈负相关（r2=0.634，P＜0.05）。结论 miR-320可能通过调控其下游靶基因survivin的异常表达参与寻常性银屑病皮损的形成过程。
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新型分子标志物miR-320在宫颈癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨新型分子标志物miR-320与宫颈癌临床病理特征的关系及临床意义.方法 收集45例宫颈癌患者癌组织及30例正常宫颈组织,应用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测miR-320水平,探讨其表达与宫颈癌临床病理特征的关系及意义.结果 miR-320在宫颈癌组织中的表达明显低于正常对照(0.67±0.31 vs l.02±0.23,P＜0.05).miR-320表达与宫颈癌临床分期及淋巴结转移密切相关(P＜0.05),而不同年龄、病理分级、肿瘤直径、绝经与否的宫颈癌患者miR-320表达水平分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-320表达水平与宫颈癌发生发展密切相关,miR-320可作为宫颈癌临床诊断及预后评估的新型临床应用标志物.
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复元醒脑汤对糖尿病脑梗死模型大鼠梗死体积的影响 及其分子机制研究
目的:观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死模型大鼠梗死体积的干预作用,从microRNA-320(miR-320)对IGF-1的负性调控途径揭示复元醒脑汤促进糖尿病脑梗死血运重建的分子机制与作用靶点.方法:健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组.除正常组与假手术组以外,其余各组大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50mg/kg后予以高糖高脂肪饲料喂养2周的方法复制糖尿病大鼠模型,采用线栓法制备糖尿病脑梗死动物模型.造模成功后中药组予复元醒脑汤灌胃,西药组予二甲双胍和尼莫地平灌胃,其余各组给予等量生理盐水灌胃,每日2次,连续14d.给药结束后处死取材,TTC染色法检测各组大鼠脑梗体积,HE染色法和透射电镜观察各组大鼠脑组织的病理形态学改变,qPCR法检测各组大鼠缺血脑组织中miR-320、IGF-1基因表达水平,Western blot法检测IGF-1蛋白表达水平.结果:西药组与中药组大鼠脑梗死体积明显小于模型组(P<0.01),脑组织病理形态也较模型组明显改善.与模型组比较,西药组与中药组大鼠缺血脑组织miR-320基因表达水平显著降低(P<0.01),IGF-1 mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.01).结论:复元醒脑汤可缩小糖尿病脑梗死大鼠脑组织的梗死体积,改善缺血脑组织病理形态学,其可能的分子机制是通过抑制miR-320表达,从而增加IGF-1的表达,增加缺血脑组织内的血管新生,促进血运重建.
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miR-320靶向Rab11对宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响
目的 探讨miR-320对宫颈癌细胞SiHa增殖、侵袭及迁移的调控作用.方法 选取宫颈癌细胞系SiHa,将细胞分为miR-320模拟基因组、miR-320抑制剂组、对照模拟基因组、对照抑制剂组,各组分别转染miR-320模拟基因、miR-320抑制剂、对照模拟基因、对照抑制剂.采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组SiHa细胞中miR-320表达;Western blot检测各组SiHa细胞中Rab11蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性.结果 miR-320抑制剂组SiHa细胞中miR-320相对表达量低于对照抑制剂组(P＜0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞中miR-320相对表达量高于对照模拟基因组(P＜0.05).miR-320抑制剂组SiHa细胞的细胞活性、侵袭能力、迁移能力高于对照抑制剂组(P＜0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞的细胞活性、侵袭能力、迁移能力低于对照模拟基因组(P＜0.05).miR-320抑制剂组SiHa细胞中Rab11蛋白表达高于对照抑制剂组(P＜0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞中Rab11蛋白表达低于对照模拟基因组(P＜0.05).miR-320抑制剂组SiHa细胞的细胞荧光活性显著低于对照抑制剂组(P＜0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞的细胞荧光活性与对照模拟基因组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-320可通过靶向Rab11调控SiHa细胞增殖、侵袭及迁移.
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微小RNA-320在肿瘤中的研究进展
微小RNA(miRNAs)是一类细胞内源性表达的小分子非编码RNA,具有转录后调控基因表达的作用.近年来,在结肠癌、乳腺癌和胆管癌等多种肿瘤中发现miR-320表达下调,提示miR-320可通过抑制细胞增殖和侵袭等方式抑制肿瘤进展.对于miR-320调控的靶基因及相关信号通路的深入研究,有助于阐明肿瘤发生发展的分子机制,并有望为临床肿瘤治疗提供新的靶点.本文就miR-320在肿瘤中的研究进展作一综述.
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白杨素调控miR-320和Twist1表达抑制卵巢癌干细胞样细胞体外致瘤功能
目的:研究白杨素能否调节miR-320和Twist1表达抑制人卵巢癌SKOV3源性干细胞样细胞体外致瘤能力.方法:不同浓度白杨素(5.0、10.0和20.0μM)处理肿瘤球培养得到的第2代球细胞即卵巢癌干细胞样细胞.实时定量PCR检测miR-320表达水平.球形成率测定和琼脂集落形成试验评价体外致瘤能力.Western blot分析Twist1蛋白表达.分别用miR-320模拟物或Twist1基因转导探讨白杨素的作用机制.结果:与亲本细胞相比,SKOV3源性卵巢癌干细胞样细胞miR-320低表达,而Twist1蛋白高表达.白杨素(5、10和20μM)以浓度依赖方式降低SKOV3源性卵巢癌干细胞样细胞球形成率和集落形成率;同时,上调miR-320表达和下调Twist1蛋白表达.miR-320模拟物转染增强白杨素(10μM)的效应.Twist1基因转导能有效逆转白杨素(10μM)的作用.结论:白杨素通过调控miR-320/Twist1信号轴抑制SKOV3源性卵巢癌干细胞样细胞体外致瘤性.
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miR-320在乳腺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨miR-320在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测108例乳腺癌组织和对应癌旁正常组织中miR-320表达,分析miR-320表达与乳腺癌病理特征的相关性.结果 乳腺癌组织中miR-320表达水平低于正常乳腺组织[(0.58±0.17)vs(1.05±0.21)](<0.05).乳腺癌组织miR-320表达水平与乳腺癌TNM分期及淋巴转移有关(<0.05);而miR-320表达水平与年龄、绝经、病理类型、肿瘤大小、C-erbB-2表达、增殖细胞核抗原(PCNA)表达、孕激素受体(PR)表达及雌激素受体(ER)表达无关(>0.05).结论 miR-320在乳腺癌组织中呈低表达,且其表达水平与乳腺癌发生发展密切相关,miR-320可能是乳腺癌特异性诊断潜在标志物和治疗新靶点.
