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沉默PKM2对乳腺癌他莫昔芬耐药MCF-7细胞系侵袭及迁移的影响
目的 探讨PKM2下调对乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药MCF-7细胞系侵袭、迁移的影响.方法 以浓度梯度法诱导获得乳腺癌他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7R);细胞增殖与凋亡试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力;Western blot 检测细胞PKM2的表达;将表达针对PKM2的shRNA慢病毒干扰载体感染耐药细胞系,RT-qPCR、Western blot验证干扰效果,分别用Transwell侵袭实验、划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力.结果 与MCF-7细胞相比,MCF-7R细胞对他莫昔芬的抵抗能力显著增强(P＜0.01),PKM2的表达水平明显升高(P＜0.01).稳定干扰PKM2的耐药细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P＜0.01),PKM2干扰后可明显抑制MCF-7R细胞的侵袭、迁移能力(P＜0.01).结论 MCF-7R细胞中PKM2表达明显高于MCF-7细胞,沉默PKM2可以抑制MCF-7R细胞的侵袭和迁移能力.
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M2-型丙酮酸激酶促进肝癌细胞的侵袭
目的:探讨M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在肝癌组织中的表达及对肝癌侵袭的影响.方法:荧光定量PCR (real-time PCR)、免疫组化(IHC)比较PKM2在肝癌和癌旁组织中mRNA和蛋白的表达水平;构建人肝癌细胞株(HepG2)PKM2干扰和过表达的细胞株,分析PKM2对肝癌细胞侵袭的影响;Real-time PCR、免疫组化、Western blot分析肝癌组织及转染后的HepG2细胞STAT3的磷酸化、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达变化.结果:肝癌标本(106/115)中PKM2、HIF-1α的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,免疫组化显示肝癌组织中的PKM2、HIF-1α的表达水平高于癌旁组织;在体外实验中,干扰PKM2能抑制肝癌细胞HepG2的侵袭,过表达PKM2促进肝癌细胞HepG2的侵袭;PKM2过表达促进STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)的磷酸化,上调HIF-1α的表达.结论:PKM2通过促进STAT3磷酸化,上调HIF-1α的表达,促进肝癌细胞的侵袭,为肝癌的治疗提供了新思路.
