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烟草曲茎病毒卫星DNA在不同寄主中的分子变异比较
近年来对一些单组分菜豆金色花叶病毒属病毒(begomoviruses)的研究发现,这类单组分begomoviruses伴随着一种新型卫星分子-DNAβ[1,2].对我国云南省发生的双生病毒的研究表明,云南begomoviruses普遍伴随DNAβ分子,DNAβ分子与致病性紧密相关,且begomoviruses与其伴随的卫星DNA的是共进化的[3-5].为了弄清卫星DNAβ是否存在类似于卫星RNA的高度变异,将烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)及其伴随卫星DNAβ的侵染性克隆共同接种本氏烟(Nicotiana benthamiana)和心叶烟(N.glutinosa),对TbCSV卫星DNAβ在不同寄主中的分子变异进行了比较.
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粉尘螨Ⅰ类变应原瞬时表达载体的构建及其在烟草中的表达
目的 构建粉尘螨I类变应原瞬时表达载体TRBO-Der f 1并观察其在烟草中的表达.方法 以粉尘螨总RNA为模板,采用RT-PCR方法 扩增Der f 1基因并定向克隆到瞬时表达载体TRBO中,转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV1301株后,抽提质粒进行酶切及PCR鉴定.将含TRBO-Der f 1重组质粒的GV1301注射本氏烟叶片,SDS-PAGE电泳检测注射3、4、5、6 d后Der f 1的表达,并进行Western blot鉴定.结果 电泳及测序表明Der f 1基因克隆成功,大小为627 bp.经PCR及酶切结果 证实重组质粒TRBO-Der f 1成功转入根癌农杆菌.SDS-PAGE电泳检测表明,该蛋白于第5和6 d在烟草叶片中高表达,并通过Western blot得到验证.结论 粉尘螨I类变应原Der f 1成功表达于烟草叶片,为进一步研究源于植物的粉尘螨疫苗奠定了基础.
