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猪轮状病毒(PoRV)文献资料
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猪轮状病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用
为了建立一种适用于猪轮状病毒(PoRV)的逆转录-环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)的快速、灵敏检测方法.依据GenBank上登录的PoRV VP7基因保守序列,设计了6条特异性引物,通过对外引物与内引物浓度比、Bst DNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和反应条件等进行优化.结果显示,当外引物与内引物浓度比为200 nmol/L∶2 400 nmol/L(1∶12)、Bst DNA聚合酶浓度为0.64 U/μL、Mg2+浓度为2.5 mmol/L、dNTP浓度为1.0 mmol/L,在恒温(60℃)条件下作用60 min,扩增效果出现明显“梯状”条带,同时对建立的RT-LAMP检测方法进行特异性和敏感性验证,其只有PoRV获得特异性扩增条带,与其他猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒等无交叉反应,具有良好的特异性,低检测分子拷贝数为1.0×102拷贝/μL,具有极高的敏感性.反应结束后肉眼可见阳性扩增产物出现白色沉淀,加入SYBR Green Ⅰ观察颜色变化可以判定结果.该方法适用于野外、基层部门和海关快速检测PoRV的新方法,在临床上有良好的推广意义.
关键词： 猪轮状病毒(PoRV) RT-LAMP 建立 应用
