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云南省人乳头状瘤病毒16型E6/E7基因的变异分析
研究人乳头状瘤病毒16型E6和E7基因在云南省的变异情况.采集获得2 000例妇科门诊样品,提取DNA,以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物,采用nest-PCR法对样品HPV-DNA高变区L1区的相应基因进行扩增、测序和分型,筛选得到20例HPV-16型病毒DNA,对其进行E6和E7基因特异性扩增,测序.结果显示20例HPV 16型E6基因中有10例在178位核苷酸发生碱基突变,突变频率为50％,E7基因中有10例在647位核苷酸发生碱基突变,突变频率为50％.进化树分析结果表明在云南省流行的HPV-16型中主要为亚洲变异型,没有发现非洲1型,非洲2型.
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反义RNA在细菌、病毒研究中的进展
反义RNA(asRNA)不仅可以调节真核生物基因表达,而且在细菌和病毒中也有沉默基因作用.耐药细菌不断增加,而发现具备新作用机制的抗生素已经非常困难,asRNA可以增敏细菌对潜在抗生素的作用,在发现新抗生素方面有应用价值.目前缺乏对人类1型免疫缺陷病毒(HIV-1)和人类乳头瘤病毒16型(HPV-16)感染的有效治疗措施,asRNA对这两种病毒有多个作用靶点,有希望发展成治疗病毒感染的有效药物.
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妇科门诊就诊患者宫颈人乳头瘤病毒感染情况的分析
目的 探讨门诊就诊患者宫颈人乳头瘤病毒感染现状以及影响因素.方法 回顾性分析来我院妇科门诊就诊的患者进行宫颈人乳头瘤病毒检测患者220例的临床资料,分析宫颈人乳头瘤病毒感染率以及影响感染的因素.结果 220例检测患者中有71例宫颈人乳头瘤病毒阳性,感染亚型以HPV-16居多;与未感染者生活习惯比较,感染者有不洁性生活史、抽烟饮酒等不良生活习惯.结论 门诊就诊患者宫颈人乳头瘤病毒感染率较高,影响该病毒感染的因素主要是不洁性生活史、抽烟饮酒等;因此为降低女性感染人乳头瘤病毒,应养成良好的生活习惯.
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细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肿瘤的识别与治疗
目的 预测人乳头瘤病毒(HPV)16型E6 E7癌蛋白的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位.方法 采用超基序法与量化基序方案相结合的办法,对目的 蛋白HPV-16E6 E7的HLA-A2限制性CTL表位进行预测.结果 E6、E7各发现3个HLA-A2限制性CTL表位.结论 超基序法与量化基序方案联合应用可以提高预测效率.
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HPV-16、EB病毒对细胞增殖的影响及与子宫颈癌发病的关系
[目的]了解宫颈癌患者人乳头瘤病毒16(HPV 16)、EB病毒(EBV)感染情况,探讨HPV-16、EBV对细胞核增殖性抗原(PCNA)表达的影响及在子宫颈癌发病中的意义.方法免疫组织化学SP法检测59例宫颈癌和20例非癌性子宫颈上皮细胞中HPV-16、EBV蛋白表达和PCNA表达的情况,并分析它们的表达与病理参数的关系.结果子宫颈癌和非癌性子宫颈上皮细胞中HPV-16、EBV及PCNA的阳性表达率依次分别为69.49%、57.63%及77.97%和30%、25%及15%;子宫颈癌和非癌性子宫颈上皮细胞中HPV-16、EBV的共同阳性表达率分别为35.59%和0%,子宫颈癌中HPV-16、EBV及PCNA的阳性表达率均高于非癌性子宫颈上皮(P＜0.05).病理Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级子宫颈癌中HPV-16、EBV、PCNA的阳性表达率分别为65.00%、55.00%、60.00%,69.57%、60.87%、82.61%和75.00%、56.25%、93.75%.各级子宫颈癌间HPV-16、EBV的阳性表达率差异无显著性,但PCNA的表达率随病理分级的增加显著上升(P＜0.05).不同期别子宫颈癌间HPV-16、EBV及PCNA的阳性表达率差异无显著性.HPV-16阳性与阴性组子宫颈上皮PCNA的阳性表达率分别为82.98%(39/47)与43.75%(14/32),两者差异有显著性(P＜0.05).EBV阳性及阴性组子宫颈上皮PCNA的阳性表达率分别为71.79%(28/39)及42.50%(17/40),两者差异有显著性(P＜0.05).HPV-16和EBV共同阳性表达的21例子宫颈癌PC-NA阳性表达率均为100%.结论HPV-16、EBV通过增加PCNA表达的促细胞增生作用可能是子宫颈癌的发生机制之一.
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HPV感染对P53、TGF-β1表达的影响及在子宫颈癌发病中的意义
目的检测人乳头瘤病毒HPV-16和抑癌基因P53蛋白及转化生长因子TGF-β1在宫颈癌的表达,并分析HPV-16对P53和TGF-β1表达的影响.方法应用免疫组化SP法检测56例宫颈癌和20例非宫颈癌组织中HPV-16、P53和TGF-β1蛋白的表达.结果 HPV-16蛋白在宫颈癌和非宫颈癌组的阳性表达率分别为57.1%和5.0%,宫颈癌组明显高于非宫颈癌组(P＜0.05).在宫颈癌HPV-16感染与非感染组P53蛋白的表达率分别为40.6%和8.3%(P＜0.05);TGF-β1蛋白表达率分别为21.9%和62.5%(P＜0.05).HPV-16感染组P53蛋白在病理分级Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的表达分别为22.2%、45.0%和66.7%,Ⅰ级和Ⅲ级间差异有显著性(P＜0.05).TGF-β1蛋白在病理分级Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的表达分别为33.3%、20.0%和33.3%,TGF-β1蛋白在病理分级的表达差异无显著性(P＞0.05)结论 HPV感染是宫颈癌发病的重要因素之一,其致癌机制可能通过变型P53蛋白表达上调,TGF-β1蛋白表达下调,引起宫颈细胞增殖失控,发生恶性转化.
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稳定感染HPV-16E6-E7的人喉咽鳞癌FaDu细胞生物学特性观察
目的:观察稳定感染HPV-16 E6-E7对FaDu细胞生物学行为的影响和调控.方法:全基因合成HPV-16E6-E7基因,将其与慢病毒载体pLV-EGFP-C在T4连接酶作用下连接.制备重组HPV-16 E6-E7慢病毒并感染FaDu细胞.将细胞分3组:实验组(重组HPV-16 E6-E7慢病毒稳定感染的FaDu细胞)、载体对照组(慢病毒空载体稳定感染的FaDu细胞)和空白对照组(未感染慢病毒的FaDu细胞).分别用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞的体外侵袭能力.结果:获得稳定感染重组HPV-16 E6-E7慢病毒的FaDu细胞,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光蛋白 EGFP表达.整合HPV-16 E6-E7基因的FaDu细胞增殖能力和侵袭力均增强,细胞凋亡率降低,S期和G2/M期细胞增加,G0/G1期细胞减少(P＜0.05).结论:成功建立了HPV-16 E6-E7基因整合的FaDu细胞.
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HPV-16型在前列腺癌人群中的表达及临床意义
目的 探讨高危型人乳头状瘤病毒(HPV)16型在前列腺癌组织及前列腺增生组织中的表达情况及临床意义. 方法 选取我院2014年9月至2016年1月经病理确诊的前列腺癌组织75例、良性前列腺增生组织50例,采用PCR结合凝胶电泳方法检测组织标本中HPV-16的表达情况,并分析其表达水平与前列腺癌各临床病理参数之间的相关性. 结果 18.6%(14/75)的前列腺癌标本中检测出HPV-16;良性前列腺增生组织中HPV-16的阳性表达率为4.0%(2/50).前列腺癌组织中HPV-16的阳性表达率高于良性前列腺增生组织,其差异具有统计学意义(P<0.05).HPV-16的表达与前列腺癌患者年龄、PSA、Gleason评分、临床分期之间差异均无统计学意义. 结论 HPV-16的感染与前列腺癌可能存在一定相关性,可能是前列腺癌的致病因子之一.
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HPV-16 E4原核表达系统的建立和表达特性研究
目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16) E4 基因( E4 ),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性.方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增 E4 完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4).经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果克隆到完整 E4 基因为342 bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%.在28 ℃和37 ℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导18 h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Western blot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His).结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16 E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础.
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HPV-16E1蛋白的表达、纯化及其抗体制备
目的:在原核细胞中表达、纯化人乳头状瘤病毒16型(HPV-16)E1蛋白并制备HPV-16 E1特异性抗体.方法:PCR扩增HPV-16 E1基因,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株.通过改变诱导温度与IPTG 浓度优化HPV-16 E1蛋白可溶性表达的条件,并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白.纯化蛋白经皮下及足垫免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性.结果:酶切和测序结果表明HPV-16 E1基因已克隆入pMAL-p2x.经优化筛选出HPV-16 E1融合蛋白诱导表达的佳条件为28℃,IPTG浓度0.5 mmol/L.经麦芽糖亲和层析法纯化获得了HPV-16 E1可溶蛋白,纯度达到95.7%.Western blot检测证明制备的抗血清能与HPV-16 E1蛋白特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1:640 000以上.结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得了HPV-16 E1蛋白,该蛋白免疫新西兰白兔制备了高效价的HPV-16 E1蛋白抗血清,为HPV-16 E1功能研究提供了抗原和检测用抗体.
