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3种温阳健脾汤药对非酒精性脂肪肝细胞增殖与凋亡的影响
通过油酸诱导正常肝细胞株LO2构建非酒精性脂肪肝细胞模型,探讨四君子汤、理中汤和附子理中汤对非酒精性脂肪肝细胞增殖与凋亡的影响.不同浓度的油酸诱导正常肝细胞株LO2构建非酒精性脂肪肝细胞模型,油红O染色观察非酒精性脂肪肝细胞的脂滴形成状况;全自动生化分析仪检测细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平.分别设正常组、模型组、模型+四君子汤组、模型+理中汤组和模型+附子理中汤组,MTT检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中PCNA,cleaved caspase-3,cleaved caspase-8,cleaved caspase-9,Bax和Bcl-2蛋白的表达情况.油红O染色结果显示,与低浓度诱导相比,80 mg·L-1油酸诱导非酒精性脂肪肝细胞模型效果佳,且诱导成功后细胞上清液中AST,ALT,TC和TG含量显著升高(P<0.01).MTT和流式细胞仪检测结果显示,四君子汤、理中汤和附子理中汤均能有效促进非酒精性脂肪肝细胞的增殖并抑制其凋亡(P<0.01),且附子理中汤的作用效果佳.Western blot检测结果显示,四君子汤、理中汤和附子理中汤能下调非酒精性脂肪肝细胞中cleaved caspase-3,cleaved caspase-8,cleaved caspase-9和Bax蛋白表达量,上调PCNA和Bcl-2蛋白的表达量,且附子理中汤的调节效果较其他2组药物处理更显著.该实验表明四君子汤、理中汤和附子理中汤均能有效促进非酒精性脂肪肝细胞的增殖并抑制其凋亡,且附子理中汤的作用效果佳,其药效机制可能与3种汤药介导增殖与凋亡相关通路中关键因子的表达有关.
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茵陈五苓散含药血清对LO2细胞株LDL-R及HMG-CoA还原酶表达的影响
目的 探讨茵陈五苓散含药血清调节血脂的可能机制并筛选其佳给药浓度及作用时间.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为菌陈五苓散低、中、高剂量组,辛伐他汀组及空白组,每组8只.菌陈五苓散低、中、高剂量组分别给予4、8、16g/(kg·d)菌陈五苓散;辛伐他汀组给予1 mg/(kg·d)辛伐他汀片;空白组给予20 mg/(kg·d)生理盐水,各组大鼠每天灌胃2次,连续3天,制备含药血清.取对数生长期的LO2细胞株经过24h孵化贴壁后随机分为茵陈五苓散低、中、高剂量组,辛伐他汀组及空白组,每组各18孔,每孔分别加入受试血清10μl.同浓度的18孔再分为3组,每组6孔,分别培养24、48、72h,实时荧光定量法检测各组细胞的低密度脂蛋白受体(LDL-R) mRNA及3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶mRNA表达情况. 结果 与空白组比较,茵陈五苓散各剂量组及辛伐他汀组各时间点LDL-R mRNA表达均明显升高,HMG-CoA还原酶mRNA表达均明显下降(P＜0.05或P＜0.01),其中茵陈五苓散在中浓度、干预48h的条件下LDL-R mRNA表达达高峰、HMG-CoA还原酶mRNA表达低.结论 茵陈五苓散含药血清调节血脂的机制可能与其能明显上调LDL-R表达、下调HMG-CoA还原酶表达有关,在药物浓度为中浓度、干预时间为48h时效果佳.
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死亡受体5在内毒素诱导人肝细胞凋亡中的作用
探讨内毒素(LPS)在体外直接作用于L()2细胞引起凋亡及可能机制.将LO2细胞常规培养7 h贴壁后,分为对照组、内毒素处理组、抗人DR5单抗mDRA-6处理组及联合组(内毒素+mDRA-6).然后在倒置显微镜下观察LO2细胞形态变化;MTT法检测内毒素对LO2细胞生长的影响;流式细胞术检测LO2细胞表面DR5的表达率;Annexin-V和PI双染法检测细胞凋亡率.结果:经内毒素处理的LO2细胞呈现明显的凋亡形态特征,出现核固缩、染色质边缘化、凋亡小体形成.流式细胞术分析表明:对照组LO2细胞表面DR5的表达率为4.8%,用内毒素(10 mg/L)处理12 h后,DR5表达率上调为37.76%.LO2细胞12 h凋亡率:内毒素处理组、抗人DR5单抗mDRA-6处理组、内毒素联合mDRA-6组细胞凋亡率分别为37.78%(早期凋亡21.65%,晚期凋亡16.13%)、29.58%(早期凋亡18.21%,晚期凋亡11.37%)和65.81%(早期凋亡50.61%,晚期凋亡15.20%)(P<0.05).细胞凋亡率与内毒素的剂量及细胞表面DR5的表达呈相关性.结论:LPS对LO2细胞的杀伤作用主要通过诱导凋亡,细胞表面DR5受体的表达上调可促进这种凋亡作用.
