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3种蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性的保护作用
目的:确定对鹿茸样品活性有保护作用的蛋白酶抑制剂种类及作用浓度.方法:选择金属蛋白酶抑制剂EDTA-2Na、胰蛋白酶抑制剂(Approtinin)和胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin),以MTT法检测其对NRK-49F细胞增殖活性和对鹿茸促细胞增殖活性的影响以及对鹿茸样品33℃放置不同时间的保护作用.用Bradford法测鹿茸样品蛋白含量并调整到作用浓度400μg/mL.结果:当EDTA-2Na、Approtinin和Pepstatin浓度分别小于200、50、400μ g/mL时对细胞增殖活性没有影响.EDTA-2Na浓度为6.25和12.5μ g/mL时对鹿茸促增殖活性有加强作用,但对于鹿茸样品高温下放置没有明显的保护作用.12.5 μg/mL的Approtinin对鹿茸促增殖活性有促进作用,并且对鹿茸样品高温放置有明显的保护作用,6.25μg/mL时效果佳(P＜0.05).12.5 μ g/mL的Pepstatin表现出对鹿茸促增殖活性的加强作用,并表现出对鹿茸样品高温放置的保护作用,但数据无统计学差异.结论:3种蛋白酶抑制剂中胰蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性有较好的保护作用.
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Lefty-2蛋白对转化生长因子β1诱导的大鼠肾成纤维细胞NRK-49F转分化的逆转作用及其机制
目的 观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制.方法 对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1 (10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1 (10ng/ml)+ Lefty -2(10ng/ml);中剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(20ng/ml);高剂量治疗组:TGF-β1 (10ng/ml)+Lefty-2(50ng/ml).通过细胞免疫荧光法观察各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,通过Western blot法检测各组α-SMA、FN、Vimentin、p-Smad3蛋白、Smad7蛋白的表达水平.结果 细胞免疫荧光结果显示,刺激组α-SMA、FN、Vimentin表达量均显著增加,治疗组较刺激组表达量均明显减少.Western blot法结果显示,治疗组α-SMA、FN、Vimentin的表达量较刺激组均下降(P＜0.01),而且呈现剂量效应.刺激组p-Smad3蛋白表达上调,治疗组p-Smad3蛋白的表达量较刺激组明显下调(P＜0.01);刺激组Smad7蛋白表达下调,治疗组Smad7蛋白的表达量较刺激组明显上调(P＜0.01).结论 Lefty-2蛋白可逆转TGF-β1诱导的NRK-49F的转分化,可降低α-SMA、FN、Vimentin的表达,可能是通过活化Smad7信号通路,抑制Smad3的磷酸化,从而抑制Smad3信号通路来实现的.
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热炸工艺对不同部位梅花鹿鹿茸细胞增殖活性的影响
目的:考察传统热炸工艺对梅花鹿鹿茸不同部位细胞增殖活性的影响;方法:利用传统热炸法炮制东北梅花鹿鹿茸,用Bradford法测定鹿茸可溶性蛋白含量;利用MTT法测定鲜鹿茸与热炸炮制鹿茸上、中、下部位对NRK-49F细胞增殖活性的影响.结果:鲜鹿茸上中下部均具有促进细胞增殖的能力,从上到下活性减弱;热炸炮制品促细胞增殖活性降低.结论:梅花鹿鹿茸具有较强的促细胞增殖能力,传统热炸炮制明显降低鹿茸的促细胞增殖的能力.
