基于SPR技术的表皮生长因子受体与新疆紫草中4种活性成分的相互作用

目的:以人表皮生长因子受体(EGFR)为靶标,从左旋紫草素,乙酰紫草素,β,β-二甲基丙烯酰紫草素,β-乙酰氧基异戊酰紫草素等新疆紫草所含的4种柰醌类活性成分中筛选潜在的EGFR抑制剂.方法:利用表面等离子体共振(SPR)技术,首先通过预吸附实验,优化固定的pH和浓度,选择佳条件,构筑EGFR生物芯片.在此基础上,以pH 7.4,浓度10 mmol·L-1的磷酸缓冲溶液(含0.005％聚山梨酯-20)作为相互作用时的缓冲溶液,实时动态研究EGFR与4种单体的相互作用.通过软件计算动力学参数,基于结合动力学常数大小,筛选抑制剂.结果:选择pH4.5,10 mmol· L-1的乙酸缓冲液、质量分数为10 mg·L-1的EGFR为其佳的固定条件,终固定量为250 RU.相互作用结果显示4种单体中,β,β-二甲基丙烯酰紫草素与EGFR有明显的结合作用,其他3种单体无明确响应.动力学参数计算结果显示,EGFR与β,β-二甲基丙烯酰紫草素相互作用的结合速率常数ka为1.27×104 L·mol-1·s-1,解离速率常数kd为2.92×10-2s-1,解离平衡常数KD为2.31×10-6 mol·L-1,卡方值(Chi2)为3.25.KD＜1 ×10-5mol· L-1,表明他们有较强的亲和力.结论:β,β-二甲基丙烯酰紫草素可能为EGFR的一种抑制剂.

基于SPR系统的TMP-Fc免疫原性分析方法建立与应用

目的:利用Biacore 3000 GxP系统建立并验证基于表面等离子体共振(SPR)技术的免疫原性分析方法,对2种重组人促血小板生成素模拟肽-Fc融合蛋白(TMP-Fc)在食蟹猴体内的免疫原性(IM)进行比较研究.方法:采用食蟹猴连续皮下注射候选药LMF(L,100,300,1 000 μg·kg-1)或参照药romiplostim(R,300 μg·kg-1)后采集血清样品,用验证的IM分析方法检测样品中的抗药抗体(ADA).筛选阈值(CP)采用信噪比(S/N)进行计算;确证阈值(SCP)经免疫抑制试验确定;其他验证指标包括灵敏度、分析范围与Hook效应、药物耐受性与精密度.结果:候选药与参照药筛选阈值分别为CPL1.54和CPR1.41.确证阈值分别为SCPL37.6％和SCPR40.9％;配制于混合食蟹猴血清(PCMS)中的阳性质控(PC)浓度为1～64 μg·mL-1,参数模型拟合良好,未见Hook效应.二者方法灵敏度分别为556和463 ng·mL-1.药物耐受性数据表明样品S/N值随药物浓度升高而降低,其信号抑制比率(inhibition)反之升高.所有阴性质控(NC)、低浓度LPC与抗体血清rsPC样品变异系数(CV)均不高于25％.样品分析结果表明各给药组均有个体检出ADA,相同剂量下L和R的ADA阳性率均为50％;2种方法(anti-L,anti-R)对R的样品检测阳性个体及其检测时间点高度吻合.结论:本研究建立并验证了基于SPR系统的IM分析方法.方法符合生物制品IM研究要求,并成功应用于2种TMP-Fc生物样品的ADA检测.

细颗粒物暴露对人群DNA损伤的影响/表面等离子体共振技术快速筛检人血清蛋白质表达的方法应用

色素与唾液相互作用的吸附动力学研究

目的 通过表面等离子体共振(SPR)技术在分子水平上原位、实时和动态监测茶黄素(TF)、姜黄素(Cur)和矢车菊素(Cy)吸附于人全唾液(WS)表面的过程.方法 运用SPR技术和Langmuir、Freundlich模型确定色素与WS之间的亲和力及色素吸附于WS表面的结合速率常数ka、解离速率常数kd、结合平衡常数KA和解离平衡常数KD.数据用单因素方差分析和SNK-q检验处理.结果 3种色素之间的ka、kd、KA和KD的差异具有统计学意义(P＜05).Freundlich 模型较Langmuir模型更适合于描述色素吸附于WS表面的等温线.色素对WS表面的吸附受到特殊反应的控制,如氢键结合.色素对WS表面的亲和力为TF＞Cur＞Cy (P＜0,05),该结果被速率常数和平衡常数所证实.结论 与Cur和Cy相比较,TF显示出与WS表面高度结合的能力,提示羟基官能团在色素与唾液相互作用中有重要作用.